r-spondin1蛋白在肠缺血再灌注损伤后肠黏膜表达及其作用机制

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1、南方医科大学硕士学位论文R-spondin1蛋白在肠缺血再灌注损伤后肠黏膜的表达及其作用机制姓名：殷刚申请学位级别：硕士专业：普通外科指导教师：吴承堂20090525硕士学位论文R．spondinl蛋白在肠缺血再灌注损伤后肠黏膜的表达及其作用机制硕士研究生：殷刚指导教师：吴承堂副教授摘要目的本研究以小鼠肠道缺血再灌注损伤模型为基础，在肠缺血再灌注损伤(intestinalischemia-reperfusioninjury，IIR)后分别检测小肠黏膜R-Spondin(RSp01)蛋白和B一链接素(B-Catenin)的分布特征和变化规律。探讨在IIR过程中肠道上皮和肠上皮干细胞的变化规律，

2、RSpol对0-Catenin在分子水平的影响，从而理解RSpol对小肠上皮绒毛区成熟细胞的作用和隐窝干细胞增殖分化可能发挥的生物学作用及其作用机制。方法1动物健康雄性昆明种小鼠50只(购于南方医科大学动物实验中心)，体重(20±2)g。2模型制作及分组随机分为对照组(10只)和实验组(40只)。实验组每只小鼠以无创伤血管夹夹闭肠系膜上动脉，20min后松夹并关腹。松夹后再分为4个亚组：A组再灌注6h，B组再灌注12h，C组24h和D组48h。对照组行单纯剖腹手术。3标本采集和实验方法制模后于相应时间点经心脏采血0．8mL后处死，将血液离心后取血清0．4mL备用。取距离回盲部5cm小肠12c

3、m作检测：2cm加入1096甲醛溶液固定12小时，HE染色后在带目镜测微尺的显微镜下随机选取10根结构完整的肠绒毛，测量其绒毛高度。4cm小肠小肠匀浆后分别用于紫外分光光度法检测二胺氧化酶(Diamineoxidase，DAO)，酶联免疫吸附实验(Enzyme．1inkedimraunosorbcntassay，ELISA)方法检测RSpol。剩余6cm标本放入RNhlater溶液，至于-80"(2冰箱保存，待行逆转录聚合酶链式反应(ResversetranscriptionPolymerasechainreaction，RT—PcR)检测RSpol和B-Catenin。4统计学处理实验数据

4、以均数±标准差标示，采用完全随即设计资料的方中文摘要差分析，SPSSl3．0软件进行统计学处理。结果1IIR后小肠绒毛高度变化对照组小肠绒毛高度明显高于实验组。再灌注后4个亚组小肠绒毛高度呈逐渐递增趋势，A组绒毛高度最低，显著低于对照组(233．91±13．13VS371．25±22．14，P<0．01)；B组绒毛高度较前有所增加，仍显著低于对照组(262．45±17．37VS371．25±22．14，P<0．01)。C组绒毛高度增加最多，达到(56．14±9．02)um，但低于对照组(316．59±16．21VS371．25±22．14，尸<0．01)：D组绒毛高度继续增加，低于对照组(3

5、44．06±15．70VS371．25±22．14，P<0．05)。2DAO活性2．1小肠匀浆DAO活性IIR后小肠匀浆DAO表达均低于对照组，但表达呈递增趋势。其中以A组下降最明显，显著低于对照组(0．28±0．05VS0．36±0．18，／2<0．01)；B组较前有所增加，仍显著低于对照组(0．30±0．06VS0．36±0．18，尸0．05)。2．2小鼠血清DAO活性变化IIR后小鼠血清

6、DAO活性与小肠匀浆DAO变化趋势相反。实验4个亚组血清DAO活性均较对照组高，其中A组DAO活性最高，明显高于对照组(0．42±0．11VS0．13±0．05，／2<0．01)；B组、C组DAO表达依次减少，和对照组比较B组(0．37±0．09VS0．13±0．05)PO．05)。3ELISA结果与对照组相比，RSpol在A组表达最低(0．35±0．02VS0．39±0．01，尸<0．01)，B组表达逐渐增多(O．36±O．02VS0．39±0．Ol

7、，尸<0．01)。随时间延长，C组表达达到峰值，并明显高于对照组(0．41±0．03VS0．39±0．Ol，尸<0．01)。D组表达迅速降低，并显著低于对照组(0．35±0．OlVS0．39±0．Ol，尸<0．01)。各处理组总体均数有显著差异(卢15．73，P