《GB13089-1991-饲料中恶唑烷硫酮的测定方法》.pdf

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1、中华人民共和国国家标准饲料中嗯哇烷硫酮的测定方法GB13089一91Methodfordeterminationofo-sanlidinethioneinfeeds本标准参照采用国际标准ISO5504-1983《含油种子及其去油后饼粕中异硫氛酸醋和嗯哩烷硫酮的测定》。1主题内容与适用范围本标准规定了饲料中嗯哇烷硫酮的测定方法。本标准适用于菜子饼粕和配合饲料中il哇烷硫酮的测定。2原理饲料中的硫葡萄糖昔被硫葡萄搪昔酶(芥子酶EC3.2.3.1)水解，再用乙醚萃取生成的嗯哇烷硫酮，用紫外分光光度计测定。3试荆和溶液除特殊规定外，本标准所用试剂均为分析纯，水为燕馏水或相

2、应纯度的水。3.1乙醚:光谱纯或分析纯。3.2去泡剂:正辛醇(C.H=OH),3.3pH7.0缓冲液:取35.3mL0.1mol/L柠檬酸(C5H807-H,O,HG3-1108)溶液(21.01g/L)于一个200ml,容量瓶中，再用0.2mol/L磷酸氢二钠(GB1263)溶液调节pH至7.0.3.4酶源:用白芥(SinapisalbaL.)种子(72h内发芽率必须大于85%，保存期不得超过两年)制备。将白芥籽磨细，使80%通过0.28mm孔径筛子，用正己烷或石油醚(沸程40-60'C)提取其中脂肪，使残油不大于2%,操作温度保持30℃以下，放通风橱于室温下使

3、溶剂挥发。此酶源置具塞玻璃瓶中4℃下保存，可用6周。4仪器、设备4.1分析天平:感量0.0001g,4.2样品筛:孔径。.28mm.4.3样品磨。4.4玻璃干燥器。4.5恒温干燥箱:103士20c,4.6三角烧瓶:25,100,250mL,4.7容量瓶:25,100mL.4.8烧杯:50ml。4.9分液漏斗:50mLo国家技术监督局1991一07一16批准1992一04一01实施GB13089一914门0移液管:2mL.4.11振荡器:振荡频率10。次/min(往复)4.12分光光度汁:有10mm石英比色池，可在200^300nm处测量吸光度。5试样制备采集具有代

4、表性的样品至少500g，四分法缩分至50g，再磨细，使其80%能通过。.28mm筛。6测定步骤6.1称取试样(菜籽饼粕1.1g，配合饲料5.5g)于事先干燥称重(精确到。.001g)的烧杯中，放入恒温干燥箱(4-5)，在103f2℃下烘烤至少8h，取出置干燥器(4-4)中冷至室温，再称重，精确到。.001go6.2试样的酶解将干燥称重的试样全倒入一250mL三角烧瓶(4-6)中，加入70mL沸缓冲液(3-3)，并用少许冲洗烧杯，使冷却至30"C，然后加入。.5g酶源(3-4)和几滴去泡剂(3-2)，于室温下振荡2h。立即将内容物定量转移至100ml_容量瓶(4.7

5、)中，用水洗涤三角烧瓶(4.6)，并稀释至刻度，过滤至100mL三角烧瓶(4-6)中，滤液备用。6.3试样测定取上述滤液(菜籽饼粕1.0mL，配合饲料2.0mL)，至50mL分液漏斗(4-9)中，每次用10mL乙醚(3.1)提取两次，每次小心从上面取出上层乙醚。合并乙醚层于25mL容量瓶(4-7)中，用乙醚(3.1)定容至刻度。从200nm至280nm测定其吸光度值，用最大吸光度值减去280nm处的吸光度值得试样测定吸光度值AE。6.4试样空白测定(菜籽饼粕此项免去，A。为零)按6.1,6.2,6.3同样操作，只加试样不加酶源(3.4),测得值为试样空白吸光度值A

6、d,6.5酶源空白测定按6.1,6.2,6.3同样操作，不加试样只加酶源<3.4),测得值为酶源空白吸光度值Ac了测定结果了.1计算公式，、行____IA二一A。一AX=(AE一A。一Ac)XCPX25X100X10-'X-二:生‘一一二些‘一二=X20.5刀子刀s式中:X—试样中P,哇烷硫酮的含量，以每克绝干样中P,}哇烷硫酮的毫克数表示;At—试样测定吸光度值;A}—试样空白吸光度值;Ac—酶源空白吸光度值;C.p—转换因素，吸光度为1时，每升溶液中p烷硫酮的毫克数，其值为8.2syn—试样绝干质量+H若试样测定液经过稀释，计算时应予考虑。7.2结果表示每个试

7、样取2个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。结果表示到0.01mg/go了.3重复性同一分析者对同一试样同时或快速连续地进行两次测定，所得结果之间的差值:在嗯哇烷硫酮含量小于或等于。.20mg/H时，不得超过平均值的20/;GB13089一91在嗯哇烷硫酮含量大于0.20mg/g而小于。.50mg/g时，不得超过平均值的15写;在嗯哇烷硫酮含量等于或大于。.50mg/g时，不得超过平均值的10000附加说明:本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出。本标准由中国农业科学院畜牧研究所负责起草。本标准主要起草人李建凡、姜云侠、高振川。