同种异体神经桥接复合体修复兔坐骨神经缺损免疫排斥的实验研究

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1、中文摘要同种异体神经桥接复合体修复兔坐骨神经缺损免疫排斥的实验研究摘要目的：本实验将体外分离、培养、提纯的胎兔雪旺细胞种植到经化学处理的脱细胞异体神经段中制成神经桥接复合体。然后将桥接复合体移植到成年兔缺损的坐骨神经，观察有无免疫排斥反应，从而证实神经桥接复合体的抗原性小或无，为临床应用同种异体神经修复周围神经损伤提供理论基础。’方法：1种植雪旺细胞的去细胞神经移植物的构建：1．1雪旺细胞培养：取怀孕28天的新西兰白兔，耳缘静脉注射空气处死后迅速取胎兔。在手术显微镜下无菌条件下取胎兔的双侧坐骨神经，尽量剥除神经外膜及束膜，应用双

2、酶(trypsin／collagenase)反复消化法与差速贴壁法分离纯化和培养雪旺细胞。1．2去细胞神经桥接体制备：取成年健康新西兰白兔一只，分别自梨状肌下缘水平以远切取双侧坐骨神经，作为异体神经的来源。用TritonX．100进行神经萃取。1．3取雪旺细胞与去细胞同种异体神经体外共同培养：制备去细胞同种异体神经移植物，显微注射法将体外培养的雪旺细胞与去细胞神经移植物共培养。2术前抽取10只成年健康的新西兰兔静脉血进行T淋巴细胞亚群检测。3种植雪旺细胞的去细胞神经移植物桥接兔坐骨神经缺损：取前述10只成年兔用速眠欣(0．1ml

3、／kg)耳缘静脉麻醉后，消毒，在左侧臀部至大腿的弧形切口，显露出坐骨神经后，造成坐骨神经20mm的缺损。美文摘要取上述制备的复合体用8／0无损伤线端端吻合，缝合臀大肌及皮肤。4术后观察兔的精神状态，饮食活动，伤口愈合情况。5组织形态学观察：观察术后5日、12日局部炎性浸润情况。6术后5曰及12日进行兔静脉血T淋巴细胞亚群检测。7统计分析：采用t检验。结果：兔术后精神状态佳，饮食良好，有跛行，伤口无感染。术后5目与12日取标本HE染色观察有少量炎性细胞浸润，无细胞变性坏死，无神经结构破坏及神经基底膜管塌陷，无移植神经中心性坏死、纤

4、维瘢痕化。移植前及移植后5日与12曰外周血中CD4‘和CD8+T淋巴细胞比例无变化(P>0．05，P>0．05)，同时CD4+／CD8+值也无升高(P>0．05)。结论：种植胎兔雪旺细胞的神经桥接复合体，植入异体后无免疫排斥，不引起宿主的全身免疫反应，有很好的组织相容性，故这种植胎儿雪旺细胞重新细胞化的神经桥接复合体将可能成为一种理想的组织工程化人工神经。关键词：免疫排斥：去细胞同种异体神经：雪旺细胞；桥接复合体；免疫原性英文摘要StudyinImmunologicRejectionoftheBridgingComplexofV

5、ariantNerveinRepairingtheDefectofRabitt’sSciaticNerveABSTRACTObjective：．InthisexperimentthecompoundnervewasmadebyfetusrabbitSchwanncellsintoacellularnerveallograft．Itwasappliedtorepairdefectsofrabbitsciaticnervetoobserveimmunologicalrejectionandconfirmtheantigenicity

6、ofthenervecomplex．Methods：1nebuildingofcompoundnervemadedbyfetusrabbitSchwanncellsintoacellularnerveallografi．1．1PreparationoftheSchwarmcellcultures：ExecutetheadoptedpregnancyNewZealandwhiterabbitandtakenoutthefetusrabbitsof28daysconceptusage．Underoperationmicroscope

7、，bothsidesofsciaticnerveswereachievedandtheexternalconnectivetissueofthenervesegmentswasstripped．Wbappliedenzymedigestion(trypsin}eollagenase)tocultureScs．Inordertoremoveandhold-backfibroblast，thedouble30mindifferentialadhesionculturewereusedintheexperiment．Wbevenadd

8、edNGF(40ng／1)toFBStopromoteSCsgrowing．FetusrabbitSchwanncellsculturedinvitrowasidentifiedbvS-100immunehistochemistry．1．2Preparation