大豆花叶病毒胶体金免疫层析试纸条的制备与rt-lamp检测

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1、万方数据大豆花叶病毒胶体金免疫层析试纸条的制各及RT-LAMP检测4．2．7单克隆抗体的大量制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯354．2．8胶体金免疫试纸条的制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯364．3结果与分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．384．3．1大豆花叶病毒外壳蛋白原核表达载体的构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯384．3．2大豆花叶病毒外壳蛋白原核表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯394．3．3大豆花叶病毒抗血清的制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯394．3．4小鼠血清效价测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯404．3．5杂交瘤细胞株的建立⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯404．3．6单克隆抗体亚型的鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯414．3．7单克隆抗体的大量制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯424．3．8胶体金的制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯424．3．9抗体与胶体金用量的比例⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯434．3．10免疫试纸条的组装⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯444．3．11免疫试纸条敏感性分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．444．3．12免疫试纸条特异性分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．454．3．13免疫试纸条检测大豆种子中的SMV⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯464．4讨论与结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．46第五章逆转录环介导等温扩增技术快速检测大豆花叶病毒⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．495．1试验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一515．2试验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．525．2．1引物设计⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯525．2．2总RNA提取⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．525．2-3LAMP和RT

4、-LAMP反应⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．535．2．4RT-LAMP检测田间样品及结果的可视化检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．545．2．5RT-LAMP检测大豆种子中的SMV⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯545．3结果与分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。555．3．1RT-LAMP检测SMV引物组的筛选⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。555．3．2RT-LAMP反应条件的优化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．565．3．3RT-LAMP检测SMV的灵敏度和特异性⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．575．3．4一步法RT-LAMP检测样品中的

5、SMV⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。585．3．5一步法RT-LAMP对田问大豆样品的检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯595．3．6RT-LAMP检测SMV的可视化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一605．3．7RT-LAMP检测大豆种子中的SMV⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯60万方数据目录5．4{寸论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．615．5结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．62本论文结论与创新点⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

6、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。65附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯攻读硕士学位期间发表的论文和申请的专利⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．致{射⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。71万方数据摘要大豆花叶病毒胶体金免疫层析试纸条的制备及RT—LAMP检测摘要大豆花叶病毒(Soybeanmosaicvirus，SMV)是一种在世界上很多国家广泛分布并极具破坏性的植物病毒，会导致大豆严重减产和种质衰退，每年都给很多国家带来巨大的经济损失，因此，建立一种快速检测SMV的方法对于检测和防控大豆花叶病毒的发生与流行是十分必要的。本研究建立了两种方法：一种为大豆花叶病毒一步免疫层析检测

7、法，该方法利用胶体金标记单克隆抗体(mAb)检测植物样品中SMV．一种为逆转录环介导等温扩增(Reverse-transcriptionloop—mediatedisothermal锄plification)检测大豆叶片和种子中的SMV的方法，两种方法都实现了对SMV快速、准确的检测。SMV的免疫层析试纸条检测：本研究利用原核表达方法体外表达大豆花叶病毒的外壳蛋白，采用腹腔免疫方式免疫小鼠，通过细胞融合技术获得杂交瘤细胞株，成功制备4株SMV单克隆抗体。并