plga三维神经导管内微丝直径影响周围神经缺损修复的实验-.研究

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1、硕士学位论文第一章材料与方法300"-'3509，雌雄不拘。饲养条件：湿度55％,---,60％，温度：22"-'24*(2。2．方法2．1PLGA神经导管与微纤维丝的制备PLGA神经导管的原材料由山东济南岱罡生物技术有限公司提供。PLGA神经导管采用溶液浇铸／粒子沥滤法，由中南大学粉末冶金国家重点实验室指导下制备。具体制作方法：先按设计要求用聚四氟乙烯制作模具；再称取109PLGA聚合物(85：15)溶于三氯甲烷中，配成10％的溶液，混合均匀；待聚合物完全溶解后，加入309经研磨过筛的氯化钠颗粒(用180目和200目的目筛过滤，粒径为70．80um)，充分搅拌混匀后，浇注于模具中；浇

2、注后静置24—48小时脱模，脱模后再静置24．48小时，让三氯甲烷自然挥发；然后在真空干燥箱中真空干燥24小时；最后将材料置于去离子水中浸泡并不时搅动，每4-6小时换一次水，连续48小时，取出后沥干水，空气干燥24小时，真空干燥48小时。制得外径为2．1mm、内径1．5mm、管壁厚度0．3mm、长度15mm、管壁微孔孔径70～80um、孔隙率约为75％的神经导管(如图1)。另取109PLGA聚合物(85：15)，PLGA溶于三氯甲烷溶液中，配成20％的溶液，待聚合物完全溶解后，置于纺丝设备中，稍抽真空排除气泡后进行加压挤出，挤出的细丝进一步加热拉伸2．3倍，将拉伸好的细丝空气干燥48小

3、时，真空干燥48小时。制得直径为60um、80um、100um、120urn、140um的微纤维丝，再将微纤维丝切断成12mm的长度若干备用(如图2)。制备好的神经导管与微纤维丝先用75％酒精浸泡30分钟，清除残余的三氯甲烷，再反复生理盐水冲洗后真空干燥，经环氧乙烷灭菌后备用。另外，取神经生长因子(NGF)冻干粉40ug，用灭菌生理盐水配成4ml的液体，再与层粘蛋白(Laminin，Ln)6ml充分混匀后备用。2．2实验分组取健康成年SD大鼠60只，6个月龄，体重300--一3509，雌雄不拘。按照随机数字表法随机分成六组，每组10只。具体分组如下：A组：PLGA神经导管内纵形放入20

4、根直径60umPLGA微丝，管内注入层粘蛋白与神经生长因子混合液0．3ml；B组：PLGA神经导管内纵形放入20根直径80umPLGA微丝，管内注入层粘蛋白与神经生长因子混合液0．3ml；C组：PLGA神经导管内纵形放入20根直径100umPLGA微丝，管内注入层粘蛋白与神经生长因子混合液O．3ml；4硕士学位论文第一章材料与方法DPLGA神经导管内纵形放入20根直径120urnPLGA微丝，管内注入层粘蛋白与神经生长因子混合液0．3ml；EPLGA神经导管内纵形放入20根直径140umPLGA微丝，管内注入层粘蛋白与神经生长因子混合液0．3ml；F组：自体神经移植组。A、B、C、D、

5、E组为实验组，F组为实验对照组。所有大鼠左后肢为实验侧，右后肢为对照侧。2．3动物模型构建取健康成年SD大鼠，称重后10％的水合氯醛(400mg／kg)腹腔注射麻醉。左后肢脱毛备皮，再将实验大鼠四肢捆绑固定于手术操作台。络合碘消毒后，铺无菌纱布。取左后肢股后外侧切口长约2．5cm。依次切开皮肤，皮下组织及筋膜，于股后肌间隙找到坐骨神经，并稍作分离，见坐骨神经直径约为0．9-,-1．1mm。于梨状肌下方约5mm处切除8mm长的坐骨神经，断端让其自行回缩，造成12mm的神经缺损。然后，将神经两断端分别套入神经导管两端内各1．5mm，显微镜下10／0无创缝合针线将神经外膜与神经导管管壁各缝合

6、2"--'3针固定。A组：放入20根直径60umPLGA微丝；B组：PLGA神经导管内纵形放入20根直径80umPLGA微丝；C组：PLGA神经导管内纵形放入20根直径100umPLGA微丝；D组：PLGA神经导管内纵形放入20根直径120umPLGA微丝；E组：PLGA神经导管内纵形放入20根直径140umPLGA微丝；A、B、C、D、E各组神经导管内均注入层粘蛋白与神经生长因子混合液0．3ml；F组：将坐骨神经白梨状肌下方约5mm处截除12mm长，再将截取的神经旋转1800后行显微镜下端端吻合。切口内滴入少许庆大霉素稀释液预防感染。最后1号丝线间断缝合筋膜及皮肤。(如图3—4)术毕

7、。术后所有动物均禁食8小时后，分笼照常喂养。术后12周取材检测。2．4检测指标2．4．1大体观察：手术后12周内，定期观察步态，伤口情况及足部变化，有无溃疡形成，并记录左后肢肌肉萎缩情况。手术后12周，切取标本前观察导管外形变化、降解情况，神经导管与神经周围组织的关系、瘢痕形成以及再生神经的连续性、外观、直径大小，有无神经瘤形成等。2．4．2电生理测定：仪器采用丹麦产高性能诱发电位／肌电图检测仪4000型，分别测量大鼠术侧坐骨神经传导速度(Nc