雷公藤甲素、人羊膜包裹同种异体神经修复周围神经缺损的实验研究

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1、河北医科大学硕士学位论文雷公藤甲素、人羊膜包裹同种异体神经修复周围神经缺损的实验研究姓名：王洪庆申请学位级别：硕士专业：外科学指导教师：田德虎201203中文摘要雷公藤甲素、人羊膜包裹同种异体神经修复周围神经缺损的实验研究摘要目的：随着现代社会的发展，道路交通事故、各种外伤的发生率逐年增加，周围神经损伤及缺损的病人在临床上日渐增多。在多数情况下，缺损距离<6cm的情况下，可以通过对神经的游离来修复，当缺损>6cm时，常常需要进行移植来修复缺损，目前临床治疗神经缺损的金标准是自体神经移植。但是可供选取的自体神经有限，并且造成神经支

2、配区感觉和运动功能的障碍。近年来同种异体神经移植因其原材料来源广泛、在结构上类似及容易获得等优点成为学者们研究的重点，但其存在的主要问题是粘连和免疫排异反应，因为这些问题未能解决，所以同种异体神经的临床应用尚无突破性进展。如何减轻同种异体神经移植后引起的免疫排斥反应及其所导致的神经粘连问题一直是困扰临床广泛应用的最大难题。雷公藤甲素是中药雷公藤的重要活性成分，具有抗炎、抗免疫、抗肿瘤的作用。羊膜是一种半透膜，其独有的结构可以阻止很多物质通过，能将异种细胞、组织等包裹于囊内，起到机械屏障的作用，可避免发生免疫排斥反应并且羊膜包裹神

3、经吻合口后，建立了一个相对密闭的空间，减轻吻合口周围粘连，防止瘢痕组织形成和减少神经生长因子流失，并为神经修复提供更佳的微环境，提高神经的修复效果。本实验构建大鼠坐骨神经缺损模型，行同种异体神经移植，移植段给予人新鲜羊膜包裹并给予雷公藤甲素，通过大体观察、光镜观察、电镜扫描、流式细胞学检测、神经电生理检测、坐骨神经功能指数、小腿三头肌湿重恢复率等指标分析、探讨雷公藤甲素、人羊膜包裹同种异体神经修复周围神经缺损的可行性。方法：选取体重200"---,2509健康SD大鼠80只，雌雄不分，随机分成A(雷公藤甲素和人羊膜包裹同种异体神

4、经组)、B(同种异体神经组)两组，每组40只。两组动物均在右侧股部暴露并切除一段坐骨神经(10mm)，将两段切取的神经交换吻合(均以10．0尼龙无损伤缝合线作单纯中文摘要间断缝合)，制备同种异体神经模型，A组异体神经用羊膜包裹并辅以雷公藤甲素，B组为对照组。术后2、4和8周行大体观察，并分别于损伤远、近端2mm处及损伤中段取长2mm的神经段，HE染色，光镜下观察；分别于术后2、4和8周取标本，透射电镜观察；分别术后3d、7d、14d和21d断尾取外周血，做流式细胞学检测cd4、cd8及cd4／cd8；术后8周行神经电生理检测及三

5、头肌湿重测量；术后4、8周进行大鼠足印分析，计算坐骨神经功能指数及其恢复率。所有数据均进行统计学处理。结果：1、大体观察：1．1两组大鼠术后手术切口均未出现感染，12天后切口拆线，一期愈2k口o1．2术后2周大部出现下肢稍肿胀，活动明显减少且跛行，精神差，进食少，2周后精神状态及饮食逐渐恢复。1．3术后2周羊膜局部稍有吸收，4周大部吸收，8周完全吸收。1．4A组移植段神经和周围组织稍有粘连且粘连较疏松，B组移植段神经和周围组织广泛紧密粘连，钝性不易分离。2、光镜观察：术后2、4、8周A组神经恢复情况明显优于B组。3、电镜观察：术

6、后2周A组髓鞘增生，部分板结构有分层、剥离现象。B组髓鞘明显增生，板层样结构融合，模糊不清，微丝、微管明显减少，部分髓鞘有分层现象；术后4周A组轴索稍水肿，线粒体、微丝、微管等细胞器数量逐渐增多。B组髓鞘仍肿胀明显，板层结构不清楚、有分离现象，线粒体、微丝、微管等细胞器较A组少。术后8周A组髓鞘较薄，光滑，板层结构清晰，轴索中线粒体、微丝、微管明显增多且形态规则。B组髓鞘可见轻度增生、水肿，轴索中线粒体、微丝、微管数量稍减少。4、流式细胞学检测：A、B两组大鼠术后第3d、第7d、第14d、第28dCD4、CD8阳性细胞百分率及C

7、D4／CD8比较，结果见附表。由表1可以看出，术后第3d，A组和B组小鼠外周血CD4、CD8阳性细胞百分率和CD4／CD8比值均增高，统计学分析没有显著性差异；术后第7d，A组和B组小鼠外周血CD4、CD8阳性细胞百分率和CD4／CD8比值均增高，但B组增高明显，统计学分析有显著性差异；第14d，A组和B组小鼠外周血CD4、CD8阳性细胞百分率和CD4／CD8比值均继续增高，但B组增高明显，统计学分中文摘要析有显著性差异；第28d，A、B两组小鼠外周血CD4、CD8阳性细胞百分率和CD4／CD8比值相对下降，统计学分析有显著性差

8、异。5、神经电生理检测：术后8周神经电生理检测结果显示，B组比A组潜伏期长，神经传导速度慢、波幅低，统计学分析有显著性差异(P