鳄胆素联合阿霉素对人肝癌细胞smmc-7721抑制作用

《鳄胆素联合阿霉素对人肝癌细胞smmc-7721抑制作用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、鳄胆素联合阿霉素对人肝癌细胞SMMC-7721抑制作用邓轶韬1，丁玉梅1，李华亮1，2，董欣2，沈雪莹1，陈清西1*（1厦门大学生命科学学院，厦门361005；2广州鼍龙生物技术开发有限公司）摘要本文研究了鳄胆素（crocodilecholine）联合阿霉素（doxorubicin）对人肝癌细胞SMMC-7721的体外抑制作用．以不同浓度鳄胆素、阿霉素单用药组和两药联合用药组作用SMMC-7721细胞，应用MTT法和集落形成实验检测细胞增殖抑制、流式细胞仪分析细胞周期分布、Westernblot

2、检测凋亡相关蛋白表达．结果显示鳄胆素、阿霉素单药与联合均能抑制SMMC-7721细胞的增殖，且呈剂量依赖效应，两药联合有协同效应（P＜0.01）．集落形成实验中对照组、鳄胆素单用药组和阿霉素单用药组的克隆形成率分别为88%、30.8%和28.5%，而两药联合后几乎没有克隆形成，表明两药联合有显著的差异．细胞周期分析显示药物处理组出现S期阻滞，联合组与对照组相比，S期细胞含量由12%上升到59%；各组均能诱导SMMC-7721细胞凋亡，并以联合组效果更佳，细胞核经Hoechst染色出现浓染致密的固

3、缩形态和强蓝色荧光;细胞中促凋亡蛋白Bax表达上调诱导细胞凋亡．研究结果表明鳄胆素与阿霉素联合对人肝癌细胞SMMC-7721有显著的抑制作用，作用效果具有协同效应．本研究有望为肝癌的联合用药治疗提供理论依据．关键词：鳄胆素；阿霉素；联合用药；肝癌；细胞凋亡中图分类号：Q356．1文献标识码：A*通讯作者：chenqx@xmu.edu.cn（陈清西）基金项目：厦门市科技计划项目：3502Z20133009，国家自然科学基金委基础科学人才培养基金科研训练及科研能力提高项目(厦门大学)（基金号：No.

4、J1310027）和厦门大学生物学科拔尖计划项目资助．12肝癌在全球范围内是一种发生率和致死率都很高的癌症，随着现代社会的发展，由于水资源污染等造成肝癌的发生率居高不下，在中国的东南沿海一带更是如此[1]．肝癌的临床治疗主要是手术、放化疗与中药结合的方法治疗．阿霉素是临床常用的化疗药物，也是肝癌的推荐用药．但阿霉素对正常细胞会产生一定的杀伤作用，造成较严重的心脏毒性和骨髓抑制作用，在临床上的应用受到了一定的限制[2]．药物联合可以减少用药剂量和增加疗效，从而降低药物的副作用，并且能避免机体对其产

5、生耐受．目前已有关于阿霉素联合其他化疗药物抑制肝癌细胞的报道[3,4]，但是通过添加另一种化疗药物来降低阿霉素的用量可能会来给机体其他的伤害，阿霉素与天然药物的联合将可能真正降低化疗药物的副作用．随着中药研究的发展，动物胆汁在医药上的应用愈发受到重视，中国药典已收载的动物胆汁制剂达到20多种．鳄胆汁是由20种以上的胆汁酸、胆汁醇及中性的甾醇类组成[5]，本实验室利用生化方法从暹罗鳄胆汁中分离提取到的有效成分命名为鳄胆素，对胆管癌、肺癌、肝癌等多种肿瘤细胞有良好的抑制作用[6]．两者联合使用还未见

6、报道．本研究探讨鳄胆素、阿霉素单独及联合作用对肝癌SMMC-7721细胞的体外抑制作用，初步探索两药单独及联合作用时的药效变化，以期减少化疗药物的用量，降低对机体的毒副作用，达到增效减毒目的，为药物的临床联合应用提供理论依据和支持．1．材料与方法1.1材料鳄胆素由本实验室从暹罗鳄胆汁中提取分离，用100%DMSO溶解，-20℃保存，实验时稀释，DMSO终浓度＜1%；阿霉素购自上海生工生物工程有限公司；RPMI-1640培养基购自Invitrogen公司；胎牛血清购自Hyclone公司；MTT购自

7、Sigma公司；人肝癌SMMC-7721细胞由厦门华侨亚热带植物引种园惠赠．1.2实验方法1.2.1细胞培养及分组人肝癌SMMC-7721细胞培养在内含10%胎牛血清、1%双抗（青霉素和链霉素）的RPMI-1640培养基（pH7.2），37℃，体积分数为5%CO212培养，取对数生长期细胞用于实验．根据对细胞处理的药物种类及浓度进行分组，即对照组，鳄胆素、阿霉素单独用药组和鳄胆素、阿霉素联合用药组．鳄胆素单独用药组的终浓度依次为5、10、15、20μg/mL；阿霉素单独用药组的终浓度依次为0.1

8、、0.2、0.4、0.8和1.0μg/mL;联合组用药组的最终浓度依次为：阿霉素（0.2、0.4、0.8和1.0μg/mL）+鳄胆素（5μg/mL），阿霉素（0.2、0.4、0.8和1.0μg/mL）+鳄胆素(10μg/mL)和阿霉素（0.2、0.4、0.8、10μg/mL）+鳄胆素（15μg/mL）．1.1.1MTT法测定鳄胆素和阿霉素单独或联合作用对SMMC-7721细胞增殖的影响用MTT法测定鳄胆素单药组、阿霉素单药组和两药联合组对SMMC-7721细胞的抑制率．取对数生长期的细胞以6×1