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《mgmt和casp3基因多态性与胶质瘤易感性的关联研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、MGMT和CASP3基因多态性与胶质瘤易感性的关联研究黄冠又张欣巫玉娟曹楚南蒲菊明悦杜永贵苴鸿川贵阳市第二人民医院神经外科贵阳市第二人民医院神经内科摘要：目的探讨MGMT和CASP3基因多态性与胶质瘤易感性的关系。方法采用病例对照研究，应用多重单碱基SNP分型技术(SNoPshot)对组织病理学确诊胶质瘤患者90例和90名健康对照人群进行基因分型，MGMTrsl2917和CASP3rs4647601两种单核昔酸多态性进行检测及分析。结果MGMT基因rsl2917和CASP3基因rs4647601的基
2、因型和等位基因频率在胶质瘤组和对照组中的分布差异均无统计学意义(P>0.05)。结论MGMTrsl2917和CASP3rs4647601位点基因多态性与胶质瘤的易感性无显著关联。关键词：MGMT;CASP3;胶质瘤;单核昔酸;多态性;易感性;收稿日期：2017-06-15基金：贵阳市卫生系统高层次创新型青年卫生人才培养计划项目［(2014)筑卫计科技合同字第009号］Received：2017-06-15胶质瘤是颅内常见的恶性肿瘤，环境因素和遗传变界可能是其发病原因111，两者间的相互作用造成DNA
3、损伤累积，并致肿瘤性转化的发牛。0-甲基鸟U票吟-DNA甲基转移酶(MGMT)基因是一种重要的DM损伤修复基因，其多态位点可导致其蛋白质相应氨基酸的改变。MGMT与胶质瘤遗传易感性研究报道较少。细胞凋亡是机体发育的正常过程，当出现紊乱后可能导致肿瘤的发生。Caspase通过内源性和外源性线粒体途径导致细胞凋亡，其中CASP3是最重要的凋亡效应子，在肿瘤的发牛和发展过程中起着重要作用，研究及1显示，CASP3遗传变异与乳腺癌、头颈部鳞状细胞癌、胃癌、肺癌等发病相关。但是与胶质瘤易感性的相关研究未见报道
4、。本研究应用多重单碱基SNP分型技术(SNaPshot)对胶质瘤患者和健康对照人群进行基因分型探讨MGMT多态位点rsl2917和CASP3多态位点rs4647601与胶质瘤的相关性。1材料与方法1.1研究对象选取2015年1月至2017年5月在贵阳市第二人民医院神经外科住院治疗的胶质瘤患者90例，同时，从本院门诊选取90名健康体检人群作为对照。90例胶质瘤患者，男48例，女42例，年龄5〜76岁，平均年龄(44.38±15.34);90例健康对照者，男52例，女48例，年龄17~77岁，平均年龄(
5、49.59±12.09)。所有患者均为新发病例，术前均未行放化疗。1.2血液采集及DNA提取经研究对象知情同意，抽取外周静脉血5inL,装入带有枸椽酸钠的试管内，置于-20°C冰箱中保存。使用Tiangen血液DNA试剂盒提取DNA并放置-20°C冰箱保存。1.3基因多态性检测采用多重单碱基SNP分型技术(SNaPshot)对研究对象进行基因型检测。应用Primer5.0软件进行引物设计，引物由上海捷瑞生物工程有限公司合成。rsl2917位点的上游引物为5'-GTCCTTGCCTCACCAGTCCC
6、-3',下游引物为5'-AAGGAAACACCGCAGATGGC-3J;rs4-647601位点的上游引物为5'-TAAGGCTTTT-GATTTAGGGA-3',下游引物为5'-CAGGGC-GAGTATCTCACAGT-3?。PCR反应体系：DNA模板1uL,10X缓冲液1.5uL,0.3mLdNTP混合物，1.5uLMgCl2,Taq酶0.3uL,上下游引物各0.3uL,加双蒸憾水至15uLoPCR扩增条件:95°C变性3min,35个循环;94°C变性15s,55°C退火15s,72°C延伸
7、30s,72°C终延伸3min。PCR扩增后取3uLPCR产物用碱性磷酸酶(FastAP)和核酸外切酶(Exol)纯化。SNaPshot延伸反应:将纯化好的PCR产物2uL加入SNaPshot引物0.1UL,SNaPshotMix试剂1uL(美国AB1公司)，加入双蒸憾水至6uLo延伸反应条件:96°C预变性lmin,96°C变性10s,52°C退火5s,60°C延伸30s,30个循环。取1PL延伸产物，加双蒸水至lOuL,95°C变性3min,立即冰水浴，应用3730XL基因测序仪进行基因型检测。
8、1.4统计学方法应用SPSS15.0统计分析软件对数据进行分析，采用卡方检验或Fisher精确概率检验进行组间基因型分布频率比较，根据比值比(0R)和95%可信区间(CI)评估相对危险度。检验水准为双侧a=0.05o2结果2.1研究对象的Hardy-Weinberg平衡检验180例研究对象的DNA样本经SNaPshot基因分型检测了位点的基因型。基因型分布均符合Hardy-Weiberg平衡，MGMTrsl2917（P=0.78）和CASP3s4647601r（P二0
