2018届二轮生物技术实践专题（全国通用）

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1、2018届二轮生物技术实践专题（全国通用）1.（2016-全国卷III）某同学用新鲜的泡菜滤液为实验材料分离纯化乳酸菌。分离纯化所用固体培养基中因含有碳酸钙而不透明，乳酸菌产生的乳酸能溶解培养基中的碳酸钙。回答下列问题：【导学号:92624073]（1）分离纯化乳酸菌时，首先需要用对泡菜滤液进行梯度稀释，进行梯度稀释的理由是O（2）推测在分离纯化所用的培养基中加入碳酸钙的作用有和o分离纯化时应挑选岀的菌落作为候选菌。（3）乳酸菌在一20°C长期保存时，菌液中常需要加入一定量的（填“蒸憾水”“甘油”或“碳酸钙”）。【解析】（1）分

2、离纯化乳酸菌时，首先需要用无菌水对泡菜滤液进行梯度稀释，这样既可避免杂菌污染，又可将乳酸菌分散成单个细胞，以便在培养基表面形成单个菌落。（2）乳酸的积累影响乳酸菌的增殖，加入碳酸钙可以中和乳酸菌代谢（无氧呼吸）过程中产生的乳酸，另外，乳酸和碳酸钙反应，进而导致碳酸钙分解形成透明圈，有利于乳酸菌的鉴别和分离。（3）对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。在3mL的甘油瓶中，装入ImL甘油后灭菌。将1mL培养的菌液转移到甘油瓶中，与甘油充分混匀后，放在一20°C的冷冻箱中保存。【答案】（1）无菌水泡菜滤液屮菌的浓度高，直接培

3、养很难分离得到单菌落（2）鉴别乳酸菌中和产生的乳酸（或酸）具有透明圈（3）甘油2.（2014-全国卷II）为了调查某河流的水质状况，某研究小组测定了该河流水样屮的细菌含量，并进行了细菌分离等工作。回答下列问题：（1）该小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是然后，将1mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37。据此可得出每升水样中的活菌数为。(2)该小组采用平板划线法分离水

4、样中的细菌，操作时，接种环通过灭菌。在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线。这样做的目的是0(3)示意图A和B中，表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。(4)该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是：振荡培养能提高培养液中的含量，同时可使菌体与培养液充分接触，提高的利用率。【解析】(1)为了检测培养基平板灭菌是否合格，可在涂布接种前，随机取灭菌后的空白平板先行培养一段时间。0・1mL稀释液中平均有

5、(39+38+37)/3=38个活菌，则每毫升稀释液中活菌的数目为38/0.1=380,则稀释前每毫升水样中活菌数目为380X100=3.8X104,则每升水样中活菌数目为3.8X1O4X1000=3.8X107o⑵接种环、接种针等金属用具可直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，以达到迅速彻底灭菌的目的。在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线，其目的是将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落。(3)比较图A和图B可以看出：A培养基中细菌的分布呈线性，是用平板划线法接种培养后得到的结果；B培养基中细菌均匀分布，是用稀释涂布

6、平板法接种培养后得到的结果。(4)振荡培养可以提高培养液中溶解氧的含量，还可以使菌体与培养液充分接触，提高了营养物质的利用率，因此振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。【答案】(1)检测培养基平板灭菌是否合格3.8X107(2)灼烧将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落(2)B(4)溶解氧营养物质1.(2013-全国卷II)临床使用抗生素前，有时需要做细菌耐药实验。实验时，首先要从病人身上获取少量样本，然后按照一定的实验步骤操作，以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性。【导学号：92624074]回答下列问题：（1）为了从样本中获

7、取致病菌单菌落，可用法或法将样本接种于固体培养基表面，经过选择培养、鉴别等步骤获得。（2）取该单菌落适当稀释，用法接种于固体培养基表而，在37°C培养箱中培养24h,使其均匀生长，布满平板。（3）为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性，将分别含有A、B、C、D四种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上的不同位置，培养一段时间后，含A的滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对抗生素A；含B的滤纸片周围没有出现透明圈，说明该致病菌对抗生素B；含C的滤纸片周围的透明圈比含A的小，说明；含D的滤纸片周圉的透明圈也比含A的小，且透明圈中出现了一个菌落，在

8、排除杂菌污染的情况下，此菌落很可能是抗生素D的o（4）根据上述实验结果，为达到抗菌目的，最好应选用抗生素o【解析】（1）实验室中对微生物纯化培养时，常用的接种方法有划线法和稀释涂布法。（2）若让已经获得的单个菌落在固体培养基上大量且均匀繁殖，常用涂布器把稀释的菌