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时间:2019-01-16
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1、代谢型谷氨酸受体5mRNA和脑梗死相关性探究【摘要】目的:观察急性脑缺血大鼠脑组织中mGluR5mRNA在不同时段的表达变化的规律,探讨mGluR5mRNA与脑梗死的相关性。方法:75只雄性Wistar大鼠按照随机数字表法分为正常对照组、手术组1、3、6、12、24h及3d.14d组及其相对应的假手术对照组,采用大鼠MCAO模型,利用原位杂交技术,检测各组mGluR5mRNA的表达。结果:与正常对照组相比,假手术对照组mGluR5mRNA表达无明显改变(P>0.05)。手术组mGluR5mRNA各时间段表达均显著高于假手术对照组及正常对照组,缺血lh其表达即有升高,比较差异均有统计学意义(P
2、0.05)o结论:mGluR5在脑缺血后升高,提示mGluR5在脑梗死中有着重要作用,从而对我们的临床研究指出一条途径。【关键词】脑梗死;mGluR5;mRNA谷氨酸是中枢神经系统中主要的兴奋性神经递质,其受体介导神经毒性作用[1-2]o本研究以线栓法建立大鼠大脑中动脉栓塞模型,采用原位杂交技术对鼠脑mGluR5mRNA进行检测,来观察谷氨酸受体在脑梗死中的动态变化规律,以待从基因水平为脑梗死治疗提供理论依据,从而针对相应不同环节进行基因敲除,早期遏制缺血性脑损害基本环节,为脑梗死的防治提供从理论到实践的科学依据。1材料与方法1.1材料mGluR5原位杂交检测试剂盒,胃蛋白酶,预杂交液,mG
3、luR5寡核昔酸探针杂交液,封闭液,生物素化鼠抗地高辛,SABC-POD,生物素化过氧化物酶,DAB显色试剂盒,原位杂交专用PBS缓冲液。1.2实验方法1.2.1实验动物及分组健康Wistar雄性大鼠75只,体重240〜300g,由内蒙古大学动物试验中心提供。按照随机数字表法分为:正常对照组、脑缺血后1、3、6、12、24h及3d、14d组(手术组)及相应的假手术对照组,每组5只。1.2.2动物模型制备采用左侧大脑中动脉(MCA0)线栓法[3-4]o大鼠用3%戊巴比妥钠腹腔麻醉,取仰卧位固定于鼠台上,消毒后颈部正中切口,露左颈总动脉和颈内外动脉,结扎并切断颈外动脉,结扎翼腭动脉,血管夹夹闭颈
4、内、颈总动脉,在颈总动脉近分叉处剪一约0.3mm小口,将头部蘸硅橡胶的尼龙鱼线经小口处插入,沿颈内动脉入颅,进线从分叉处算约19〜21mm,稍感阻力时停止,此时已至大脑中动脉,结扎颈总动脉进线处,剪去多余的栓线,缝合手术切口。1.2.3脑组织的处理于上述规定时间点,将大鼠深麻后快速断头取出脑组织,固定、脱水、浸蜡、包埋脑组织,再制成6Um厚冠状切片。1.2.4进行原位杂交将石蜡切片烤箱内过夜,经常规脱蜡至水,用胃蛋白酶混匀,经预杂交、杂交后洗涤,滴加封闭液、SABC及生物素化过氧化物酶,DAB显色后用苏木素复染后充分水洗,经酒精脱水、二甲苯透明后用树胶封片。1.2.5观察病理变化在400倍显
5、微镜视野下观察各组脑皮质缺血区相应的病理变化。1.3图像分析采用江苏省捷达科技公司的形态分析系统进行图像分析,每张切片随机选取10个单位面积,测量原位杂交的灰度值。灰度值降低表明mGluR5mRNA表达升高,灰度值越小,说明mGluR5mRNA表达升高越明显,反之亦然。1.4统计学处理采用SPSS12.0软件对所得数据进行统计分析,计量资料用(X土S)表示,比较采用t检验,以P0.05)□手术组与正常对照组和假手术对照组相比,脑缺血后1h缺血皮质区mGluR5mRNA灰度值明显降低,即缺血皮质区mGluR5mRNA胞浆内表达明显升高,比较差异均有统计学意义(P0.05)。手术组各时间点缺血皮
6、质区mGluR5mRNA胞浆内表达与手术组缺血6h比较差异均有统计学意义(P0.05),说明单纯的手术操作对mGluR5mRNA表达无明显影响。根据上述研究,可选择性地将mGluR5作为治疗脑缺血神经损伤的靶点,为脑梗死的防治提供了新的思路,具有一定的临床应用前景[ll-12]o参考文献[1]SimonyiAJ,SunGY.ChangesinmRNAlevelsforgroupImetabototropecglutamatereceptorsfollowinginuterohypoxiaischemia[J].BrainResDev,1999,112(1):31-37.[2]MaryseP,
7、FabiolaM.Roleofmetabotropicglutamatereceptor5signalingandhomerinoxygenglucosedeprivation-mediatedastrocyteapoptosis[J]・Molecularbrain,2013,6(5):9.[3]杨彦玲,陈雅慧•大鼠大脑中动脉线栓法制备局灶性脑缺血模型的研究现状[J].临床神经电生理学杂志,2007,16(6
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