野薄荷组织培养脱病毒技术研究

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1、野薄荷组织培养脱病毒技术研究　　摘要[目的]采用热处理结合茎尖分生组织培养的方法，研究薄荷组培脱毒技术。[方法]以薄荷组培苗为试材，在高温热处理不同天数后剥取茎尖，进行薄荷花叶病毒脱毒技术研究，同时采用RT-PCR法检测其脱毒效果。[结果]适合薄荷热处理时间为20～45d，试管苗的成活率可达66.7%～90.0%；32～38℃热处理35～45d剥取0.3～0.5mm的茎尖进行培养，脱毒率为100.0%。[结论]热处理结合茎尖培养是一种脱除薄荷病毒的有效途径。　　关键词薄荷；组织培养；热处理；脱毒；RT-PCR　　中图分类号S567.

2、23+5文献标识码A文章编号1007-5739（2016）06-0061-02　　StudyonVirus-freeTechniqueofMenthahaplocalyxbyTissueCulture　　XIEWen-shen1FUYan-kun2ZHOULu1ZHANGQing-hua3　　（1SpiceResearchInstituteofYunnanAgriculturalUniversity，KunmingYunnan650051；2KunmingUniversity；3CollegeofHorticultureandLan

3、dscapeofYunnanAgriculturalUniversity）　　Abstract[Objective]Thetechniqueofvirus-freeinMenthahaplocalyxwasstudiedbycombingtissueofshoot-tipwithheatingtreatment.[Method]Menthahaplocalyxinvitrowasusedastest9materialinthisexperimenttoeliminatebycombingtissueofshoot-tipwithhe

4、attherapy，anddetectedbyindirectRT-PCRmethod.[Result]Thesuitabletimeforheattreatmentwas20～45days，thesurvivalrateoftissuecultureseedlingwasupto66.7%～90.0%；0.3～0.5mmshoot-tipwithheattreatmentby32～38℃for35～45daysofMenthahaplocalyxwere100.0%freefromCMVandTMV.[Conclusion]Com

5、bingtissueofshoot-tipwithheatingtreatmentisanefficientwayofvirus-freeinMenthahaplocalyx.　　KeywordsMenthahaplocalyx；tissueculture；heattreatment；virus-free；RT-PCR　　薄荷（MenthahaplocalyxBriq），唇形科薄荷属多年草本。性凉味辛，以全草入药；具有清利头目、透疹功能，用于治疗风温初起[1-5]、风热感冒、头痛、麻疹、喉痹、风疹、目赤等症。薄荷是世界三大香料之一[

6、4]，在国际市场上，薄荷主要作为食品、化妆品的添加剂，用来增加气味、改善口味等。现阶段，薄荷的市场需求量巨大。但薄荷在生长过程中，由于品种更新缓慢、易感毒、优良性状退化等原因，导致薄荷的产量和经济效益都大大降低[1，5-6]。薄荷的主要病毒是黄瓜花叶病毒（CMV）和烟草花叶病（TMV）[7]。9　　热处理主要是利用病毒和寄主植物对高温忍耐性的差异，当植物组织处于高于正常温度的适当高温环境时[1-5]，可部分或完全钝化植物组织中的病毒，但寄主植物组织很少或不会受到伤害。在马铃薯、草莓和葡萄的脱毒研究[8-13]中，热处理结合茎尖培养法

7、的应用最多；而在观赏植物上，热处理在百合、大丽花和罗汉果的脱毒研究[14-19]中也有应用，脱毒效果均很好。尚未见该法应用于薄荷脱毒的研究报道。本文以感病野生薄荷为材料，采用“热处理+茎尖培养”的脱毒方法，培养脱毒薄荷组培苗的培养技术。　　1材料与方法　　1.1试验材料　　田间选取表现花叶症状的野薄荷品种[1]，采用RT-PCR测定法，检测烟草花叶病毒（TMV）及黄瓜花叶病毒（CMV）。试验材料为经检验呈阳性的母株，采取其顶芽及带芽茎段为外植体[2]。　　1.2试验方法　　1.2.1准备脱毒材料。用饱和肥皂粉液刷洗外植体，要求清洗干

8、净，在流水下冲洗60min后，置于超净台。先用75%（体积分数）酒精加数滴吐温灭菌30s，用无菌水涮洗3遍，每遍1min，再添0.1%升汞灭菌8～10min，最后用无菌水涮洗5～7遍[1-5]，每遍1min。灭菌后将外植体转入启动培养