甜瓜蒂中总葫芦素的纯化工艺研究

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1、甜瓜蒂中总葫芦素的纯化工艺研究　　摘要：葫芦素系葫芦科植物甜瓜（CucumismeloL.）瓜蒂的提取物。纯化工艺方面：通过比较，选择D101大孔吸附树脂对提取物进行纯化，得到的总葫芦素中含葫芦素B（CUB）约30%，确保了葫芦素提取部位的质量。同时使用大孔树脂吸附树脂的方法，减少了有机溶剂对药品的污染。　　关键词：葫芦素;纯化工艺;研究　　基金项目：吉林省教育厅课题项目（吉科教合字〔2014〕第452号）　　中图分类号：R284.2文献标识码：ADOI编号：10.14025/j.cnki.jlny.2015.24.038　　甜

2、瓜蒂始载于《本经》，为葫芦科植物甜瓜的干燥果柄[1]，含杂醇，皂苷，氨基酸，葫芦苦素（cu-curbitacin）B、D、E，异葫芦苦素（isocucurbitacin）B，葫芦苦素B-2-O-β-D-吡喃葡萄糖甙（cucurbitacinB-2-O-β-D-glucopyranosi-de）等。甜瓜蒂粗提取物中有效成分总葫芦素（CU）含量较低，杂质的存在会大大降低提取物的药效，同时也不利于葫芦素B单一组分的分离制备。　　大孔吸附树脂是一种不含交换基团，具有大孔结构的高分子吸附剂。大孔吸附树脂与凝胶和天然吸附树脂相比，有表面积大

3、、吸附量大、选择性好、吸附速度快、易于解吸附、物理化学稳定性高、再生处理简便、使用周期长、易于构成闭路循环和节省费用等诸多优点[2]。近年来，在药学领域（尤其天然药物）中的应用普遍受到重视。6　　本课题是在确定最佳醇提工艺后，使用大孔吸附树脂对葫芦素分离工艺进行了系统考察，通过研究大孔吸附树脂对葫芦素的纯化工艺，确定了一条较为科学合理的纯化工艺路线。　　1仪器与试药　　1.1仪器　　AL204电子天平：梅特勒―托利多仪器（上海）有限公司;SY-8100型高效液相色谱仪：北京普析通用有限公司;旋转蒸发仪：上海申生科技有限公司;薄层

4、色谱用硅胶（批号：140427）：青岛海洋化工有限公司。　　1.2试药　　葫芦素B对照品（98%）：成都普菲德生物技术有限公司;各型号树脂：山东鲁抗立科药业有限公司。　　2上样样品制备　　在预实验中，先后比较了活性炭吸附除杂、甲醇溶解后拌样工艺，通过比较发现：前者虽然可以除去叶绿素等大量杂质，但同时也吸附了许多有效成分，损失较大且操作繁琐;后者经甲醇溶解后的液体与树脂拌样，很好的满足了试验的需要，所以最后确定选择甲醇溶解后拌样的方式作为上样液的预处理方式。　　方法：称取瓜蒂提取物干膏适量，用甲醇溶解，与树脂拌样，挥干甲醇，作为上

5、样样品，备用。　　3大孔吸附树脂种类的筛选　　3.1不同大孔吸附树脂对总葫芦素静态饱和吸附量的考察6　　取已处理好的干树脂（AB-8，DM130，D301，D101）各约1.0克，精密称定，置于100毫升锥形瓶中，精密加入甲醇溶解的醇提物5.0毫升（0.5毫克/5毫升），摇匀。间隔20分钟振摇一次，共进行2小时，然后静置24小时，使其充分吸附，平行3份，进行含量测定，测出吸收度值并计算饱和吸附量，结果见表1。　　表1不同大孔树脂对CU的静态吸附性能比较　　表2不同大孔树脂对CU的静态解吸性能比较　　从表1可以看出，D101树脂对

6、CU的吸附率和静态吸附量均较高，从静态吸附角度来讲吸附效果较理想。　　3.2不同大孔树脂对葫芦素的静态解吸性能比较　　将上述己吸附饱和的大孔吸附树脂滤出，用滤纸吸干上样液，置于100毫升锥形瓶中，精密加入70%乙醇20毫升，摇匀，超声半小时，然后静置后，含量测定，平行3份，测出吸收度值并计算静态洗脱率，结果见表2。　　总CU的富集和精制是其纯化工艺和质量控制的关键，CU为非极性化合物，一般需要选用非极性大孔吸附树脂。本实验通过比较几种型号的大孔吸附树脂的静态吸附性能和静态洗脱性能，D101型大孔吸附树脂无论在饱和吸附量以及洗脱率

7、都表现最佳，所以最后确定D101型大孔吸附树脂作为纯化树脂。　　4洗脱溶剂的选择　　称取已处理好的D101型大孔吸附树脂10.0克，水充分溶涨后，装入层析柱中，精密吸取上样液10.0毫升（相当于原药材5.0克），拌样上样，以2BV/h6的流速过柱，上柱后，依次用蒸馏水、30%乙醇、50%乙醇各400毫升梯度洗脱，70%乙醇1000毫升和95%乙醇400毫升洗脱，每200毫升收集液浓缩至干，分别以甲醇溶解后移入10毫升容量瓶中，以甲醇定容后，采用高效液相色谱法测出吸收值，计算各部分洗脱率。确定洗脱溶剂，选取洗脱较集中的洗脱溶剂继续

8、下一步试验。以洗脱液体积为横坐标，洗脱比例为纵坐标。结果见表3。洗脱曲线见图1。　　表3洗脱溶剂考察结果　　图1大孔树脂洗脱曲线　　实验结果表明：蒸馏水能够洗脱糖类等杂质，而不会洗脱葫芦素类成分，因此，可以初步确定洗脱工艺条件为：先以水30%、50%乙醇洗脱，除