一种从动物源性化妆品中快速提取dna的方法研究

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1、一种从动物源性化妆品中快速提取DNA的方法研究　　摘要：为了达到从分子水平上检测化妆品动物源性成分的目的，本研究建立了一种从化妆品中提取动物源性基因组DNA的方法。该方法使用Chelex-100结合玻璃奶提取化妆品中的基因组DNA，具有污染小、操作简单、快速、高效等优点。分别利用紫外分光光度计、普通PCR和DNA测序等方法对提取DNA的质量进行检测，结果表明DNA浓度和纯度均能达到后期分子检测要求。说明本方法提取的DNA适用于在分子水平上检测化妆品的动物源性成分。　　关键词：化妆品；动物源性；基因组DNA；提取方法　　中图

2、分类号：S188文献标识号：A文章编号：1001-4942（2016）09-0131-05　　AbstractInordertoachievethepurposeofdetectinganimaloriginofcosmeticsatthemolecularlevel，amethodforextractinggenomicDNAofanimaloriginfromcosmeticswasestablished.TheChelex-100andGlass-milkwereusedtoextractgenomicDNAfrom

3、cosmetics.Thismethodhadadvantagesoflesspollution，easytooperate，fastandhighefficient.Then，thequalityofgenomicDNAwasdetectedbyUVspectrophotometer，PCRandDNAsequencing.TheresultsshowedthattheconcentrationandpurityofDNAbothmettherequirementsoflatermolecularexperiment.I

4、t7indicatedthattheDNAexactedbythismethodwassuitableforthedetectionofanimaloriginofcosmeticsatthemolecularlevel.　　KeywordsCosmetics；Animalorigin；GenomicDNA；Extractionmethod　　近年来具有美容护肤功效的马油、马奶和驴奶等被广泛应用于化妆品中，且此类化妆品倍受亚洲女性青睐。马油的应用在我国历史悠久，《名医别录》中记载马脂肪具有生发护发作用，《本草纲目》中记载马

5、脂肪味甘、平、生发。马油易被皮肤吸收且有美白作用，另外还有加速皮肤新陈代谢、增强细胞活力、抗皮肤衰老等功效[1]。马奶被阿拉伯人视为“阿拉所赐的神药”，欧洲贵妇人使用马奶沐浴以保持皮肤光滑、美丽，马奶洗面奶不仅能防止皮肤老化，还有消除皱纹的神奇功效[2]。驴奶中的VA、VE、VC和B族维生素抗氧化、抗衰老，可阻止细胞内不饱和脂肪酸氧化分解，阻止皮肤干燥和角质化，其中所含的芋碱酸可以使皮肤细白、柔嫩光滑、有弹性[3]。　　由于马油、马奶和驴奶具有很好的美容功效，所以近年来马油、马奶和驴奶制品的价格均高于普通的牛奶制品，市场需

6、求不断扩大，在经济利益的驱使下，部分没有驴、马资源的化妆品厂家用牛奶冒充驴奶和马奶，甚至有的厂家的马奶、驴奶化妆品中不含有任何动物源性成分，严重危害了消费者的健康和利益。7　　目前我国对化妆品中动物源性成分的检测还比较薄弱。从分子水平上检测化妆品中的动物源性成分是最准确有效的方法，而该方法首先需从化妆品中提取基因组DNA。由于化妆品特殊的加工工艺及所含成分复杂，其中的DNA成分已受到严重的破坏，这给DNA的提取带来很大困难。本研究旨在建立一种能简单、快速、高效地从化妆品中提取动物源性基因组DNA的方法，为化妆品中动物源性成

7、分的检测奠定基础。　　1材料与方法　　1.1试验材料　　市售不同品牌的马和驴动物源性油膏、面膜、面霜、乳液和洗面奶等化妆品共20份。　　1.2试剂与设备　　Chelex-100为Sigma公司产品；GlassMilk为Thermo产品；DNA分子量MarkerDL2000、TaKaRaPCR仪、电泳上样缓冲液等购自宝生物工程（大连）有限公司；蛋白酶K购自生工（上海）有限公司；5424D型高速离心机，Eppendorf公司；凝胶成像仪，BIO-RAD公司。　　1.3化妆品中动物源性DNA的提取　　取液体状（200μL）、膏状

8、或固体（200mg）化妆品样品放入2mL离心管中，加入5%的Chelex-100280μL及20mg/mL蛋白酶K20μL，56℃保温30min以上，高速振荡5～10s；100℃水浴8min，高速振荡5～10s；13000r/min离心3min，将上清转入新的离心管中（候选步骤，将溶液转移至离心柱中，1