介绍一种快速从血清标本中提取HBV DNA的方法.doc

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1、介绍一种快速从血清标本中提取HBVDNA的方法作者：郭龙华，黄宪章，庄俊华【关键词】乙型肝炎病毒；DNA提取　【摘要】目的分别用商品化试剂盒和笔者摸索改良的裂解液煮沸法从血清标本中提取HBVDNA，比较二者的提取效果。方法收集40例经商品化试剂盒荧光PCR定量检测HBVDNA含量全部＞1.0×104copies/ml的血清标本，然后用笔者摸索改良的裂解液煮沸法提取标本中的HBVDNA，进行荧光定量PCR检测，对检测结果进行统计学分析。结果两种方法提取的HBVDNA含量差异无显著性（P>0.05）。结论裂解液煮沸法是一种

2、快速、高效的提取血清中HBVDNA的方法。【关键词】乙型肝炎病毒；DNA提取AkindsoffastmethodstoextractHBVDNAfromserumsamples【Abstract】ObjectiveTochoseawaythatcanquicklyextractHBVDNAtemplatesfromserumsamplesbycomparingtheeffectoftwokindsofmethods.MethodsTheauthorcollected40samplesprovedbythefluorescen

3、cePCRwithHBVDNAlevelbeyond1.0×104copieds/ml,extractedHBVDNAtemplatesfromtheserumsamplesbythewayofseethingwithdisruptionliquidandcomparedtheconcentrationofHBVDNAtemplates.ResultsThereisnodistinctdifferencebetweentheeffectofthewayofseethingwithdisruptionliquidandthek

4、itway（P>0.05）.ConclusionThewayofseethingwithdisruptionliquidisaquick,andhighefficientwaytoextractHBVDNAtemplatesfromserumsamples.【Keywords】hepatitisBvirus;DNA乙型肝炎病毒（hepatitisBvirus,HBV）是不完全环状双链DNA病毒，全长约3.2kb，是目前已知对人类致病的最小双链DNA病毒，严重威胁着人类生命健康。乙型肝炎是一种世界性的传染病，全球乙型肝炎

5、患者和HBV携带者约有3亿多，其中我国达1亿之多。随着分子生物学技术的发展，人们可以通过检测血液中HBVDNA含量了解病情和判断药物的疗效，近些年来HBV的变异一直是人们研究的热点［1~3］，这些都需要从血清中提取HBVDNA，如何快速、高效提取血清中HBVDNA就显得很重要。笔者在实践中摸索出裂解液煮沸法检测HBVDNA，现介绍如下。31材料与方法1.1材料（1）标本：收集40例HBVDNA含量全部＞1.0×104copies/ml的血清标本（来源于我院门诊和住院病人），HBVDNA含量均值为1×106.68±1.12co

6、pies/ml。（2）主要仪器:Roche公司LightCycler型荧光定量PCR仪、飞鸽牌TGL-16B台式高速离心机。（3）主要试剂:广州达安基因公司HBVDNA荧光PCR定量检测试剂盒，裂解液（自配）。1.2方法（1）用广州达安基因公司HBVDNA荧光PCR定量试剂盒的方法提取血清中HBVDNA，用荧光PCR仪检测HBVDNA模板含量。收集40例HBVDNA含量全部＞1.0×104copies/ml的血清标本。（2）裂解液煮沸法：是经作者摸索改良的方法［4］。裂解液配制参照文献［5］（10mmol/LTris-HCl

7、，1mmol/LEDTA,15mmol/LNaCl,0.5%SDS,pH为8.0）。取50μl血清加10μl裂解液，混匀，煮沸10min,5000×g离心5min，取上清液备用，平均每管大约可以取到20μl上清液。提取上述标本的HBVDNA，用荧光PCR仪检测HBVDNA模板含量。1.3统计学方法利用SPSS10.0统计软件对HBVDNA模板含量进行成组t检验分析，以P>0.05为差异无显著性。2结果两种方法提取的HBVDNA含量检测结果见表1。表1两种方法提取的HBVDNA含量的比较由表1可知，裂解液煮沸法与试剂盒法

8、HBVDVA含量比较，t=1.35，P>0.05，表明两种方法提取的HBVDNA含量差异在统计学上无显著性。3讨论血清中HBVDNA的提取方法有多种，商品试剂盒也多种多样，但绝大多数试剂盒的原理和试剂配方是保密的，并且成本较高。目前国内文献中提取HBVDNA使用较多的是苯酚法，该法虽