动物医学毕业论文rt-pcr隐孢子虫鸡胚

《动物医学毕业论文rt-pcr隐孢子虫鸡胚》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、Real-timeqPCR检测鸡胚中贝氏隐孑包子虫方法研究郭官鹏(2011届动物医学专业3班)摘要：为检测鸡胚中贝氏隐砲子虫，本研究根据GenBank公布的贝氏隐胞子虫和原鸡18SrRNA基因序列设计针对贝氏隐胞子虫的特异性引物，并以标准基因组DNA为模板，建立贝氏隐胞子虫SYBRGreen实时荧光定量PCR(Real-timeqPCR)方法，并对含有贝氏隐胞子虫的鸡胚尿囊液样品进行检测。结果表明，建立的SYBRGreenReal-timeqPCR方法可特异性扩增出贝氏隐胞子虫，而且建立的标准曲线线性关系良好(R2=0.998)

2、o进一步做重复性结果显示试验重现性较好。本研究建立了快速、特异的定量检测鸡胚中贝氏隐胞子虫Real-timeqPCR方法，可用于对贝氏隐胞子虫在鸡胚中繁殖规律分析和药物筛选评估。关键词：Real-timeqPC'R:贝氏隐胞子虫：鸡胚EstablishmentofaSYBRGreenReal-TimeqPCRAssayforDetectionofCryptosporidiumBaileyiinchorioallantoicmembraneGUOGuan-peng(Class3ofVeterinaryMedicine,Gradua

3、tedin2011)Abstract：InordertodetectCryptosporidiumbaileyiinallantoicfluid.Real-timeqPCRmethodwasestablishedwithprimersdesignedaccordingtheC.baileyiandchicken18SrRNAfromGenBank.ThismethodwasvalidatedonallantoicfluidsamplesincludingC.baileyi.Theresultsshowedthatamplific

4、ationofDNAfromtheC.baileyiweredetected,otherswerenot(Candersonichorioallantoicmembrane;chickembryotracheal;Eimeriatenella;Escherichiacoli)・StandardcurvesofReal-timeqPCRwasprecise(R2=0.998).Insummary,arapidandspecificReal-timeqPCRmethodforthedetectionofC.baileyiinall

5、antoicfluidsampleshasbeendeveloped,whichcouldbeservedasavaluabletoolforevaluatingproductionandassessingpotentialdrugofC.baileyiinchickenembryo.Keywords:Real-timeqPCR;Ciyptosporidiumbaileyi}Chickenembryo隐抱子虫(Cryptosporidium)是寄生于人和动物胃肠道和呼吸道上皮细胞内能引起人畜共患隐抱子虫病(cryptospori

6、diosis)的一种原虫⑴。现今，包括中国在内，在世界6大洲90个国家300多个地区己发现隐泡子虫，其能感染包括人在内的240多种动物⑵。对于免疫功能正常宿主，其主要引起自限性腹泻。对于免疫抑制患者，尤其是获得性免疫缺陷综合症(AIDS)患者，感染后危害严重，且常常引起死亡⑶。贝氏隐孑包子虫(C.baileyi)为感染鸡的优势种，主要寄生于鸡喉头、气管、法氏囊和泄殖腔等部位，可引起雏鸡呼吸道症状，导致生产性能下降甚至死亡；当与其它免疫抑制性病原混合感染时，将造成更严重的经济损失世界上大多数国家均有鸡隐也子虫病的报道，美国乔治亚州

7、蛋鸡群感染率为10%〜60%,肉鸡群为41%；苏格兰鸡群感染率为88%[5]0在我国，不同地域报道的鸡隐抱子虫感染率差异较大，宁夏、上海、湖南、合肥、河南等地感染率分别为27%、12.1%、36.81%、50.83%、11.40%⑹。鉴于隐泡子虫病对人类健康和畜牧业生产的巨大危害，自上世纪八十年代以来隐泡子虫病研究日益成为全球范围内人兽共患病领域内的一个研究热点。人们在隐砲子虫分类地位、种类鉴定、分子流行病学、传播机制、免疫机理、检测技术和药物防治等方面进行了大量的探索性研究，取得了丰硕的研究成果⑺。目前，隐抱子虫虫定量分析常用

8、方法包扌H：定量PCR（real-timequantitativePCR,real-timeq-PCR）s显微镜计数法（计数显微镜下每个视野屮荧光标记或其它化学方法染色虫体）、酶联免疫吸附分析（ELISA）、光化学免疫分析和原位杂交比色法等冋。其中Real-ti