解脲脲原体自配培养基应用评价

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1、解腺腺原体自配培养基应用评价蔡丹锋1郑宗富2(1福建省泉州市惠安县医院检验科福建泉州362100；2解放军476医院检验科福建福州362100)【中图分类号】R446.12【文献标识码】A【文章编号】1672・5085(2013)30-0257-02【摘要】目的比较解服服原体(Uu)自配培养基与浪峰分离鉴定培养基的符合率，以寻找适应Uu扩增所需廉价高效培养基。方法用甘油冰冻保存菌株，临床标木同时接种自配培养基和浪峰液体培养基，观察并记录解眠眠原体牛长的时间、培养基颜色变化的程度及阳性率，然后将三种液体培养基培养阳性标木接种血平板，鉴定以判断杂菌牛长情况。结果自配培养基加HEPES

2、、自配培养基无加HEPES和浪峰培养基对甘油冰冻保存菌株的复苏率为98.2%、98.2%、98.2%.对临床标木的分离率为35%、35%、40%。自配培养基与浪峰培养基阳性率(P>0.05)、生长速度(P>0・05)、抑制杂菌能力(P>0・05)无显著性差异。结论自配培养基同浪峰培养基相比在分离阳性率、牛长速度和抑制杂菌能力方面达到了浪峰培养基同等效果。【关键词】解服服原体培养基解月尿月尿原体(Ureaplasmaurealyticum)是非淋菌性尿道炎(NGU)的主要病原⑴，在我国性传播疾病患者中支原体感染以Uu为主，据报道50%-80%非淋患者中分离到Uu[

3、2]°Uu液固培养法是公认的敏感方法，是新方法评价的“金标准”、是确诊Uu感染的可靠方法⑶目前国内常用的Uu液体培养基是以培养出Uu为终目的的，以培养基颜色变红为判定标准，而当培养基颜色变红时，大量的Uu己经死亡，还存在着抑菌能力差、价格昂贵。为此我们参考文献⑺解月尿月尿原体尿素培养基进行改良以适应Uu的大量扩增，并将自配培养基在分离阳性率、培养颜色变化程度、抑菌能力与浪峰培养基进行测试比较。1.材料1.1甘油冰冻保存菌株：据文献⑸保存的本院细菌室培养阳性标本。1.2临床标本：分别用无菌棉签或无菌试管收集泌尿系感染患者的生殖道分泌物、前段尿、前列腺液共56份（其中宫颈拭子30份、

4、前列腺液5份、尿液21份）年龄19・55岁，3小吋内送达实验室。1.3培养基：自配培养基成分1640基础培养基70ml,胎牛血清20ml,25%无菌鲜酵母浸出液10ml,40%尿素1.5ml,多粘菌素（5000u/ml）0.5ml,调PH值至6.0,HEPES0.075M3ml；参照试剂浪峰支原体培养鉴定记数药敏试剂（批号20030401）厂家：珠海市浪峰生物技术公司。2方法2.1培养方法⑴甘油冰冻保存菌株复苏后接种。在无菌操作下以生理盐水洗涤甘油冰冻保存菌株,13000r/min离心洗涤2遍，取沉淀物接种自配培养基（加HEPES）和自配培养基（无HEPES）,浪峰培养基。（2）

5、临床标本:棉拭子在自配培养基和浪峰培养基中清洗后挤干弃去，同时接种自配培养基，浪峰培养基；尿标本取10ml2000r/min离心lOmin弃去上清，每次取沉淀同时接种自配培养基和浪峰培养基；前列腺液标本直接接种液体培养基，同吋设空白对照，各管加石蜡油2滴。置于37C水浴箱培养。具体操作如表2.2结果观察：接种10h后每隔2h观察培养基的颜色变化，培养基指示剂呈橙色/红色清亮定为阳性为Uu生长的指征。与空白对照比较，记录三种培养基颜色变化的时间，观察至48h,若48h培养基颜色仍未变化者定为阴性。3•阳性及假阳性的鉴定3.1血平板接种：将经自配培养基和浪峰培养基培养阳性标本以无菌方

6、式接种10%羊血平板，24-48h观察是否有细菌生长。3.2革兰染色并接种尿素管：从分离血平板取菌落接种于尿素管中，同吋做革兰染色，次日培养基变红者，定为杂菌能分解尿素。3.3PCR将自配培养基和浪峰培养基培养阳性标本行PCR聚合酶链反应以检测杂菌的生长情况[6]o4.结果4.1自配培养基与浪峰培养基对甘油冰冻保存菌株的复苏阳性率比较：自配培养基和浪峰培养基对甘油冰冻保存菌株的复苏率分别为90%和95%。差异无显著性(χ2=1.02,P>0.05)其中有一例自配培养基加HEPES呈阴性而无加HEPES和浪峰培养基呈阳性.4.2自配培养基与浪峰培养基对临床标本的分离阳

7、性率比较:自配培养基的分离阳性率为35%;浪峰培养基的分离阳性率为40%,差异无显著性(χ2=1.02,P>；0.05)o共有2例自配培养基阴性，而浪峰培养基阳性J例自配培养基阳性而浪峰培养基阴性。4.3自配培养基与浪峰培养基生长速度的比较:自配培养基加HEPES缓冲剂，自配培养基无HEPES缓冲剂，浪峰培养基三者以浪峰培养基生长速度最快，自配培养基加HEPES缓冲剂最慢•见附表5.讨论由于Uu的培养较为困难，营养要求高，本试剂用1640为基础培养基以提供适宜的电解质