石杉碱甲人工抗原的合成鉴定及免疫原性分析

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1、文章编号：石杉碱甲人工抗原的合成、鉴定及免疫原性分析宋建武1，晁　志2，董为人1（南方医科大学：1基础医学院组织学与胚胎学教研室，2中医药学院，广州510515）摘要：目的　制备乙酰胆碱脂酶抑制活性成分石杉碱甲（HuperzineA，HupA）的人工抗原及抗血清。方法　将HupA与戊二醛、载体蛋白牛血清白蛋白（BSA）反应偶联，制得半抗原-载体蛋白复合物后，用基质辅助激光解吸飞行时间质谱测定其中结合的半抗原数目；以此抗原免疫BALB/c小鼠，制备抗血清，并通过ELISA法检测其抗体效价和特异性。结果　合成的人工抗原H

2、upA-GA-BSA中HupA与BSA的结合比约为8:1；免疫小鼠得到特异针对HupA的抗血清，HupA抗体的效价为1:62500。结论　成功地合成了HupA的人工抗原，且该抗原有较好的免疫原性。关键词：石杉碱甲；半抗原-载体蛋白复合物；免疫原性；酶联免疫吸附测定中图法分类号：文献标识码：ASynthesisofhuperzineA-bovineserumalbuminconjugateanditsimmunogenicityanalysisinmiceSONGJian-wu1,CHAOZhi2,DONGWei-re

3、n1（DepartmentofHistologyandEmbryology,CollegeofBasicMedicine1,SchoolofTraditionalChineseMedicine2,SouthernMedicalUniversity,Guangzhou510515,China）Abstract:ObjectiveTopreparehuperzineA-carrierproteinconjugateanddetermineitsimmunogenityforlaterproductionofmonoclo

4、nalantibodyagainstHupAandestablishinganenzyme-linkedimmunosorbentassay(ELISA)-baseddetectionmethodofHupA.MethodsHupAwasconjugatedwithbovineserumalbumin(BSA)usingglutaraldehyde(GA)methodtoobtaintheHupA-GA-BSAconjugate,andthehaptennumberintheconjugatewasdetermine

5、dbymatrix-assistedlaserabsorptionionizationtime-of-flightmassspectrometry(MALDI-TOF-MS).BALB/cmicewereimmunizedwithHupA-GA-BSAtopreparetheantiserumagainstHupA.TheserumtiterandspecificityoftheHupAantibodiesweredetectedbyindirectELISAandcompetitiveELISA,respectiv

6、ely.ResultsTheconjugationratioofHupAandthecarrierproteinBSAwas8:1.TheantiserumagainstHupAwithatiterof1:62500wasobtainedafterimmunizingthemicewiththeconjugate,andtheantiserumreactedspecificallytoHupA.ConclusionThesynthesizedHupA-GA-BSAconjugatepossessesgoodimmun

7、ogenityinmice,suggestingthefeasibilityofpreparingthemonoclonalantibodyagainstHupAusingthisconjugate.Keywords:HuperzineA;hapten-carrierproteinconjugate;immunogenity;enzyme-linkedimmunosorbentassay作者简介：宋建武，男，新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市人，硕士研究生，讲师，主要从事抗体工程方面的研究。电话：（020）61647792通

8、信作者：晁志，电话：（020）61648256，E-mail:chaozhi1971@yahoo.com.cn收稿日期：2009-05-19；修回日期：2009-07-15石杉碱甲（HuperzineA，HupA）是从中国石杉科石杉属蛇足石杉（Huperziaserrata）（俗称千层塔）中分离得到的一种天然新型石松类生物碱有效单体，为高效、高