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1、釉基质蛋白(EMPs)对大鼠牙髓干细胞体外增殖、分化能力的影响刘锐,倪龙兴(第四军医大学口腔医学院,陕西西安710032)摘要:目的:研究釉基质蛋白(EnamelMatrixProteins,EMPs)对大鼠牙髓干细胞(ratDentalPulpStemCells,rDPSCs)体外增殖分化能力的影响。方法:酶消化培养法获得大鼠牙髓干细胞,有限稀释法分离纯化大鼠牙髓干细胞,形态学观察,计算细胞克隆形成率。乙酸法制备EMPs,用不同浓度的EMPs进行诱导,利用四唑盐比色法(MTT)法检测和分析诱导后细
2、胞增殖活性的变化。并检测诱导后培养液中的碱性磷酸酶(AlkalinePhosphatase,ALP)。免疫组化染色和RT-PCR方法检测牙本质涎蛋白(dentinsialoprotein,DSP)、牙本质基质蛋白1(dentinmatrixprotein1,DMP-1)和牙本质涎磷蛋白(dentinsialophosphoprotein,DSPP)的mRNA的表达。结果:大鼠牙髓干细胞呈集落状生长,在体外具有一定的克隆形成能力。EMPs对大鼠牙髓干细胞的增殖有促进作用,并呈现剂量和时间依赖性。200
3、μg/mlEMPs组可显著促进大鼠牙髓干细胞的增殖。EMPs作用组能显著提高大鼠牙髓干细胞的碱性磷酸酶活性。经细胞因子刺激后细胞表达DSP、DMP-1蛋白和DSPP的mRNA。结论:EMPs在大鼠牙髓干细胞增殖和向成牙本质细胞分化方面具有积极的作用。关键词:釉基质蛋白;牙髓干细胞;增殖;分化EffectsofEMPsonproliferationanddifferentiationofratdentalpulpstemcellsinvitroLiuRui,NiLong-xing(collegeofs
4、tomatology,TheFourthMilitaryMedicalUniversity,Xi’an710032,China)AbstractObjectiveToinvestigatetheeffectofEMPsontheproliferationanddifferentiationofratdentalpulpstemcellsinvitro.MethodsMono-cellsuspensionwasseparatedfromtheratdentalpulpwithcollagenaseⅠa
5、nddispasedigestion.Colony-formingefficiencyofcellswascalculated.EMPswasmadebyaceticacidmethod,thedentalpulpstemcellswereaffectedbydifferentconcentrationsofEMPs.TheeffectwasexamedbyMTTassay.AlkalinePhosphatase,DSP,DMP-1proteinandDSPPmRNAwereexamedafteri
6、nducement.ResultsClonogeniccellswereobtainedfromdentalpulpandthecolony-rateis1.8%.TheproliferationofrDMSCswassignificantlystimulatedbyEMPs.EMPsalsoincreasedtheactivityofALPintracellular.DSP,DMP-1proteinandDSPPmRNAexpressedineffectedcells.Conclusion:EMP
7、scanplayapositiveroleinpromotingtheproliferationanddifferentiationofrDPSCs.KeywordsEnamelMatrixProteins,DentalPulpStemCells,proliferation,differentiation通讯作者:倪龙兴,电话:(029)84776475,E-maill:nilx200605@yahoo.com.cn干细胞是人体的起源细胞,具有自我复制、高度增殖和多向分化的能力。Gronthos等【
8、1】于2000年第1次提出了牙髓干细胞(dentalpulpstemcells,DPSCs)的概念,并在体外成功分离、培养。它们正常情况下处于静息状态,进行细胞新旧交替,以维持牙髓组织内环境稳定;当外界刺激导致成牙本质细胞受损以后,能增殖、分化为成牙本质细胞,形成修复性牙本质,参与牙髓组织修复再生过程。已知有多种因子在这一过程中起重要的调控作用。釉基质蛋白(enamelmatrixproteins,EMPs)作为牙齿发育的细胞外基质,可诱导无细胞性牙骨质形成,被广泛应