微生物鉴定中常用的生化反应

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1、有些细菌具有合成淀粉酶的能力，可以分泌胞外淀粉酶。淀粉酶可以使淀粉水解为麦芽糖和葡萄糖，淀粉水解后遇碘不再变蓝色。细菌产生的脂肪酶能分解培养基中的脂肪牛成出由及脂肪酸。脂肪酸可以使培养基pH下降，可通过在油脂培养基屮加入屮性红做指示剂进行测试。屮性红指示范围为pH6.8（红）〜8.0（黄）。当细菌分解脂肪产生脂肪酸时，则菌落周围培养基中出现红色斑点。某些细菌分泌蛋白酶分解明胶，产生小分了物质。如果细菌具冇分解明胶的能力，则培养基可由原来同体状态变成液体状态。详细实验方法•微生物鉴定中常用的生化反应实验材料•大肠杆菌•枯草杆菌•金黄色葡萄球菌

2、•产气肠杆菌•铜绿假单胞菌•黏乳产碱杆菌•普通变形杆菌试剂、试剂盒•油脂培养基•淀粉培养基•明胶液化培养基•石蕊牛乳培养基仪器、耗材平接酒试接1111种精管种实验原理有些细菌具有合成淀粉酶的能力，可以分泌胞外淀粉酶。淀粉酶可以使淀粉水解为麦芽糖和葡萄糖，淀粉水解后遇碘不再变蓝色。细菌产牛的脂肪酶能分解培养基屮的脂肪牛成甘油及脂肪酸。脂肪酸可以使培养基pH下降，可通过在油脂培养基中加入中性红做指示剂进行测试。中性红指示范围为pH6.8(红)〜8.0(黄)。当细菌分解脂肪产生脂肪酸时，则菌落周围培养基中出现红色斑点。某些细菌分泌蛋口酶分解明胶，

3、产牛小分子物质。如果细菌具有分解明胶的能力,则培养基可由原来固体状态变成液体状态。牛乳中主要含有乳糖、酪蛋口等成分。细菌对牛乳的利用主要是指对乳糖及酪蛋口的分解和利用。牛乳屮常加入石蕊作为酸碱指示剂和氧化述原指示剂。石蕊小性时呈淡紫色，酸性时呈红色，碱性时呈蓝色，还原时则部分或全部脱色。细菌对牛乳的利用可分三种情况：(1)酸凝固作用：细菌发酵乳糖后，产生许多酸，使石蕊牛乳变红，当酸度很高时，可使牛乳凝固，此称为酸凝固。(2)凝乳酶凝固作用：某些细菌能分泌凝乳酶，使牛乳中的酪蛋白凝固，这种凝同在屮性环境屮发生。通常这种细菌述具冇水解蛋白质的能

4、力，因而产生氨等碱性物质，使石蕊变蓝。(3)腺化作用：酪蛋白被水解，使牛乳变成清亮透明的液体。腺化作用可以在酸性条件下或碱性条件下进行，一般石蕊色素被还原褪色。实验材料1、活材料:大肠杆菌(E.coli)、枯草杆菌(Bacillussubtilis).金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、产气肠杆菌(Enterobacteraerogenes)、黏乳产碱斥菌(Alcaligenesviscolactis)、铜绿假单胞菌(Psudomonasaeruginosa)、普通变形杆菌(Proteusvularis)。2、培养基

5、：淀粉培养基：牛肉膏蛋口月东培养基加0.2%的可溶性淀粉；油脂培养基：牛肉膏蛋白陈培养基加花生油10mL.0.6%屮性红水溶液明胶液化培养基：蛋白月东5g,明胶100〜150g,水WOOmL,pH7.2〜7.4,115°C灭菌2Omirio石蕊牛乳培养基：牛奶粉100g＞石蕊0.075g＞水1000mL、pH6.8,12TC灭菌15min。3、试剂：卢哥氏碘液。实验用品平皿、接种环、酒精灯、试管、接种针等。实验方法（一）淀粉水解试验1、准备淀粉培养基平板：将熔化后冷却至50°C左右的淀粉培养基倒入无菌平皿中，待凝固后制成平板。2、接种：用记

6、号笔在平板底部划成两部分，在每部分分别写上菌名，用接种环取少量的待测菌，点接在培养基表面的相对应部分的中心，其中一个菌种应是枯草杆菌做对照菌。★你能解释原因吗？3、培养：将接种后的平皿置于28°C恒温箱培养24h。4、检测：取出平板，打开平皿盖，滴加少量的碘液于平板上，轻轻旋转，使碘液均匀铺满整个平板。菌落周围如岀现无色透明圈，则说明淀粉已经被水解，表示该细菌具有分解淀粉的能力。可以用透明圈大小说明测试菌株水解淀粉能力的强弱。（-）油脂水解试验1、将装有汕脂培养基的三角瓶置于沸水浴中熔化，取出并充分振荡，使汕脂均匀分布，再倾入无菌平」HL中

7、，待凝固成平板。2、接种：于同一平皿的两边接种，其中一种是金黄色葡萄球菌作为对照菌。置于37°C恒温箱培养24h,取出后观察平板菌苔颜色，如果出现红色斑点，即说明脂肪被水解了，此反应为正反应。红色斑点大小说明测试菌株水解脂肪能力的强弱。（三）明胶液化试验1、接种：用穿刺接种法接种大肠杆菌或产气肠杆菌于明胶培养基小。2、培养：放20°C恒温箱屮培养48h。若细菌在20°C下不长，则应放在最适温度下培养。3、观察结果：观察培养基有无液化情况及液化后的形状。因明胶在低于20°C时凝固，高于25°C时自行液化，若是在高于20°C下培养的细菌，观察时

8、应放在冰浴屮观察，若明胶被细菌液化，即使在低温下明胶也不会再凝固。（四）石蕊牛乳试验1、接种：将黏乳产碱杆菌和铜绿假单•胞菌接种入石蕊牛乳培养基屮。2、培养：将接种后的试管于37