细菌鉴定中常用的理化生化反应

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1、实验日期：2017.11.1实验班级：牛物技术指导教师：张建丽姓名：高熹学号：1120152430细菌鉴定中常用的理化生化反应一、实验目的1）了解细菌牛理牛化反应原理2）通过细菌对不同含碳、氮化合物的分解利用情况了解细菌碳、氮代谢类型的多样性。3）了解细菌在培养基中生长现彖及其代谢产物在鉴别细菌中的意义。二、实验原理1）糖（醇）类发酵实验因细菌所含的酶不同，其发酵糖（醇）后的代谢产物亦不相同，即可产酸产气，或产酸不产气。酸的产生可利用培养基中澳甲酚紫的颜色变化进行判断（PH5.2黄色一6.8紫色），即当发酵产酸时，可使培养基由紫色变为黄色。气体产生可由发酵管内倒置的杜氏小管中有无气泡来判断

2、。2）甲基红（Methylred）实验（MR实验）大肠杆菌等许多细菌分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸可进一步分解成甲酸（或乙酸乳酸），使培养基的pH降低到4.2以下，此时加入甲基红指示剂，呈现红色。产气杆菌等分解葡萄糖产生丙酮酸，培养基的pH在6.2以上，故此时加入甲基红指示剂，呈现黄色。3）伏-普（Voges-Proskauer）氏实验（V・P.实验）Ih()HCIX)UClh2・3-「：醉Clh■co；

3、oClIOIInatnCATCXC产气气杆菌：V・P•试验阳性甲基红试验阴性K)H-2H大肠杆菌:V・P•试验阴性甲基红试验阳性卩卩CH)二乙他红色化合物4）靛基质（呵喙）实验大肠杆菌等

4、能分解蛋白质中的色氨酸，产生靛基质（卩引味），靛基质与对二甲基氨基苯甲醛结合形成玫瑰色靛基质（红色化合物）。5）硫化氢实验某些细菌能分解含硫的氨基酸（胱氨酸半胱氨酸等），产生硫化氢与培养基中的铅盐或铁盐，形成黑色沉淀硫化铅或硫化铁•为硫化氢实验。6）明胶液化实验某些细菌具有胶原酶，使明胶被分解,失去凝固能力，呈现液体状态,为明胶实验阳性。7）淀粉水解实验细菌不能直接利用淀粉，须经淀粉酶将淀粉水解为小分子糊精或进一步水解为葡萄糖（或麦芽糖）后被细菌吸收利用，细菌水解淀粉的过程可通过底物的变化来证明，即加碘液测定吋，不再产生蓝色。8）柠檬酸盐利用实验产气杆菌等能以柠檬酸钠为碳源进行生长。其分

5、解柠檬酸盐后产生碳酸盐,培养基呈碱性•使培养基中的漠麝香草酚蓝指示剂由绿色变为蓝色.不能利用柠檬酸盐为碳源的细菌，在该培养基上不牛长，培养基不变色.三.实验试剂及器材实验仪器和用具：恒温培养箱、试管、无菌平皿、杜氏小管、接种环，酒精灯；微牛物材料：大肠杆菌，变形杆菌，枯草杆菌，产气杆菌斜面；试剂：甲基红试剂、V.P试剂、呵味试剂格里斯试剂（A、B）、卢戈氏碘液；培养基：葡萄糖和乳糖发酵培养基（糖类发酵实验）葡萄糖蛋白腺水培养基（甲基红和V.P.实验）胰蛋白水培养基（“引味实验）柠檬酸铁鞍或醋酸铅的半固体培养基（硫化氢实验）明胶培养基（明胶液化实验）淀粉培养基（淀粉水解实验）柠檬酸钠斜面培养

6、基（柠檬酸盐利用实验）硝酸盐培养基（硝酸盐利用实验）。四、实验步骤1）糖（醇）类发酵实验1.编号：2.接种：杆菌，在试管上标明培养基名称，所接种的菌名和组号.取3支葡萄糖发酵培养基，1支接种大肠杆菌，1支接种变形留1支不接种，作为对照.3.乳糖发酵试验接种方法同葡萄糖发酵试验。将己接种好的培养基置37°C培养箱中培养24h.4.结果观察:若细菌能发酵培养基中的糖，可使培养基的pH降低，培养基中的指示剂呈酸性反应（为黄色），若发酵糖产酸产气，不仅培养基呈黄色,且在倒置的小玻璃管（杜氏小管）中有气体（气体占杜氏小管的10%以上）；若被测细菌不分解培养基中的糖，则培养基不发生变化。2）甲基红实验

7、（MR实验）1.取3支葡萄糖蛋白腺水培养基，标记同上。2.取1支接种大肠杆菌，1支接种产气杆菌，1支不接种，作为对照。37°C培养48h,加甲基红指示剂数滴，观察结果。1.结果：呈现红色者为阳性，呈现黄色者为阴性。3）伏-普实验（V.P.实验）取3支葡萄糖蛋白腺水培养基，1支接种大肠杆菌，1支接种产气杆菌，1支留作对照。37°C培养48h取出，加入40%KOH5-10滴，然后再加入等量的5%蔡酚溶液，用力振荡,再放入37°C培养箱中保温15-30min加快反应速度.若培养物呈现红色,为伏-普反应阳性。4）靛基质（呵喙）实验取3支胰蛋白腺水培养基，1支接种大肠杆菌，1支接种产气杆菌，1支留作

8、对照。37°C培养24-48h后，沿试管壁滴加数滴H引味试剂于培养物液面，观察结果•呈现玫瑰红色为阳性，不变色为阴性。5）硫化氢实验取3支醋酸铁或柠檬酸铁半固体培养基，采用穿刺接种法，1支接种大肠杆菌，1支接种变形杆，1支作对照。37°C培养24h观察结果，若有黑色沉淀线出现为阳性。6）明胶液化实验取3支营养明胶培养基，用穿刺接种方法，1支接种大肠杆菌，1支接种枯草杆菌，1支作对照。37°C培养48h后，将明胶培养基轻轻