大鼠骨髓间充质干细胞的培养鉴定以及向神经干细胞分化的实验研究

《大鼠骨髓间充质干细胞的培养鉴定以及向神经干细胞分化的实验研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、大鼠骨髓间充质干细胞的培养鉴定以及向神经干细胞分化的实验研究蒲晓姝，果磊重庆医科大学附属第一医院烧伤整形外科，重庆400016【摘要】目的体外培养并鉴定大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs），研究其生物学特性，初步探索酸性成纤维细胞生长因子（aFGF）诱导其向神经干细胞（NSCs）分化的可行性。方法全骨髓贴壁培养法分离培养大鼠BMSCs，倒置相差显微镜观察其形态特征，MTT法绘制生长曲线，流式细胞仪（FCM）测定细胞周期并鉴定细胞表面标志物。用80ng/mlaFGF的无血清DMEM/F12培养液诱导大鼠BMSCs向NSCs分化，镜下观察细胞形态特征，免

2、疫荧光染色方法检测神经巢蛋白（nestin）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）的表达。结果大鼠BMSCs贴壁生长，呈梭形，多角形。第1、3、5代BMSCs的生长曲线均呈S形，活性无明显差异。细胞周期显示94.34%BMSCs处于G0/G1期，有较强的分裂增殖能力。FCM检测CD29、CD54、CD90表达阳性，CD45表达阴性。诱导6h后细胞的胞体收缩成椭圆形或球形并伸出细长突起，免疫荧光染色显示nestin表达阳性，继续诱导发现双极和多极细胞增多，诱导6d后相互连接成网状，成典型的神经元样细胞，NSE表达阳性。结论全骨髓贴壁培养法能培养出高纯度的B

3、MSCs，细胞生长稳定、增殖快、可多次传代，具有干细胞特性。经aFGF诱导后具有向NSCs分化的潜能，NSCs能进一步分化为神经元样细胞。【关键词】骨髓间充质干细胞；全骨髓贴壁培养法；诱导分化；神经干细胞；酸性成纤维细胞生长因子TheexperimentalstudyoncultivationandidentificationofratbonemarrowmesenchymalstemcellsandtheirdifferentiationintoneuralstemcellsPuXiaoshu,GuoLei.DepartmentofBurnand

4、PlasticSurgery,theFirstAffiliatedHospitalofChongqingMedicalUniversity,Chongqing400016,China.［Abstract］ObjectiveTocultureinvitroandidentifyratbonemarrowmesenchymalstemcells(BMSCs),studytheirbiologicalcharacteristics,andinitiallytentativelyexplorethefeasibilityofacidicfibroblast

5、 growthfactor (aFGF)inducingBMSCstodifferentiateintoneuralstemcells(NSCs).MethodsRatBMSCswereisolatedandculturedbythewholebonemarrowadherentculturemethod.ThemorphologicalcharacteristicsofBMSCswereobservedundertheinvertedphasecontrastmicroscopeandthecellgrowthcurvesweredrawnbyM

6、TTmethod.Thecellcycleandsurfacemarkersweredetectedwithflowcytometry(FCM).RatBMSCswereinducedtodifferentiateintoNSCsby80ng/mlaFGFofDMEM/F12medium.ThecellmorphologicalchangeswerecontinuouslyobservedafterusingaFGF.Immunofluorescencestainingwasusedtodetecttheexpressionsofnestinand

7、neuronspecificenolase(NSE).ResultsRatBMSCsshowedadherentgrowthandspindle-shapedorpolygonalappearance.The growthcurve of the1st,3rd,5th-generation BMSCs showedS-shapeandnosignificantdifferencein activity.FCMshowed that therewere94.34% ofBMSCs in G0/G1phaseofthecellcycle,havings

8、trong proliferation ability.FCMdetected thatCD29,CD54andCD90