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《β-甘露聚糖酶产生菌的筛选和酶学性质探讨》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、B-甘露聚糖酶产生菌的筛选和酶学性质探摘要：从土壤中分离筛选出5株产胞外甘露聚糖酶的菌株，其中DK3菌株的摇瓶培养液的酶活力达/ml。该酶水解葡甘露聚糖的最适温度为37°C,最适pH为，pH稳定范围为在低于40°C的温度下基本稳定。Fe2、Cu2、EDTA和NH4对该酶有抑制作用,Na则有激活作用。关键词：B-甘露聚糖酶；筛选；酶学性质BT,4-D-甘露聚糖酶(BT,4-D-mannanmannanohydrolase,)是一类能水解含有3-1,4-D-甘露糖为主链的多糖(包括甘露聚糖、半乳甘露聚糖、葡甘聚糖等)的内切酶［1］。该酶用途广泛，能分解魔芋葡甘露聚糖，生产能促进双歧杆
2、菌生长、改善肠道菌群结构的魔芋低聚糖；可作为工具酶用于天然多糖类结构的分析；在造纸工业中，与B-木聚糖酶等半纤维素降解酶类协同使用，能除去纸浆中的半纤维素，改善纸质；在纺织工业中用于纤维中半纤维素的降解，能有效去除纺织品所粘附的多余染料；在饲料工业中用作酶添加剂，起到消除抗营养因子的作用［2-4］0虽然B-甘露聚糖酶的应用前景广阔，但目前总的来说，其低产和高成本限制了其应用范围和规模，能改变这种状况的最重要的途径之一是筛选和培育产高活力B-甘露聚糖酶的高产菌株。1材料与方法土壤来源土壤样品从广西大学农场甘蔗地、广西南丹县魔芋种植地和南宁绿源肥料厂堆肥地采集。试剂葡甘露聚糖（商品名
3、：魔芋精粉）购自武汉市清江魔芋制品有限公司。其它试剂均为分析纯试剂。培养基富集培养基（）:魔芋精粉，酵母膏，蛋白腺,；固体分离培养基（）：魔芋精粉，，MgS04・，，，FeS04•,琼脂，；发酵培养基（）：魔芋精粉，酵母膏，蛋白豚，，MgS04•,,,FeSO4・，；产酶培养基（）：魔芋精粉，，MgS04・,，，FeS04・,。菌株的分离和筛选称取1g土壤于试管中，加入10ml蒸馅水，振荡混匀,取1ml接种到富集培养基中，37°C,160rpm培养24h0选择培养液粘度明显下降的菌液，用无菌水梯度稀释后涂布于固体分离培养基中，置37°C培养箱中培养24h,用刚果落进行划线纯化。经
4、纯化后的菌株在发酵培养基中培养24h,测定培养液中B-甘露聚糖酶的活力，筛选出酶活力高的菌株。红染色，观察菌落周围有无透明圈，挑取透明大的单菌B-甘露聚糖酶粗酶液的制备将菌株接种于发酵培养基中，37°C培养24h,按1比例接入产酶培养基中，37°C,160rpm培养24h。发酵液离心所得上清液即为粗酶液。B-甘露聚糖酶酶活力的测定酶活力的测定：取（w/v）葡甘露聚糖（用，/L磷酸钠缓冲液配制），加入适当浓度的酶液，37°C水浴反应15min,用DNS法测定所产生的还原糖［7］。酶活力单位定义：在上述反应条件下，每分钟由底物释放岀相当于1AmolD-甘露糖的还原糖所需酶量为1个酶活
5、力单位（U）。2结果菌株筛选从土样中筛选出5株产B-甘露聚糖酶的高产菌株（编号为DK1〜5），其中DK3菌株的摇瓶培养液的粘度下降快，菌落周围有大的透明圈，摇瓶培养液中的B-甘露聚糖酶活力达/ml（表1）。表1菌株筛选结果菌株编号B-甘露聚糖酶活力(U/ml)DK1DK2DK3DK4DK5酶学性质的研究温度对酶活力的影响：在30~70°C下测定B-甘露聚糖酶的活性，结果表明，该酶分解葡甘露聚糖的最适温度为37°C,在30〜45°C都具有较高的活力(图1)。图1B-甘露聚糖酶促反应最适温度温度对酶稳定性的影响：将酶液分别置于40、50、60°C恒温水浴中处理，每隔20min取样，测
6、定残留酶活力（以未经处理的酶液作对照）。结果表明，该酶在40°C下相对稳定（图2）。图2B-甘露聚糖酶的温度稳定性对酶活力的影响：配制，//L柠檬酸缓冲液,，/L磷酸盐缓冲液和,/L甘氨酸-氢氧化钠缓冲液为酶促反应缓冲液，测定不同pH值下的酶活力。结果表明，酶促反应的最适pH为（图3）。图3B-甘露聚糖酶促反应最适pH值对酶稳定性的影响：将酶液与上述不同pH的缓冲液混合，37°C静置lh后，调pH至，测定酶活力。结果表明，该酶在〜相对稳定（图4）。图4pH对B-甘露聚糖酶活
