特殊染色技术

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1、(-)过碘酸-希夫氏染色(PAS染色)PAS染色可以显示肾小球内的细胞增生、浸润和系膜基质等，并能很好的显示基底膜，是显示糖原和糖蛋白的基木染色。1.需要试剂2.具体染色步骤(1)切片常规脱蜡入水。(2)入1%过碘酸氧化10~15min,水洗。(3)入schiff氏液染10~30min,水洗。(4)苏木素染细胞核r2min,水洗。(5)入1%盐酸乙醇分化数秒，水洗。(6)氨水返蓝数秒，水洗。(7)流水冲洗，镜下观察细胞核成蓝色，基底膜染成粉红色。(8)梯度乙醇脱水、二甲苯透明、树胶封片。3.染色结果PAS阳性物质(多糖和糖原)呈红色，核呈

2、蓝色。4.注意事项(1)组织切片的脱蜡步骤应彻底，否则组织无法着色。(2)Schiff氏液染色的时间需严格控制。时间过长标本基底膜着色太深，时间过短标本基底膜着色淡。(3)入1%盐酸乙醇分化时间要短，时间长容易使标本褪色。(4)染色后的组织切片要将组织四周的污染物痕迹擦掉。(―)六胺银-马松染色(PAM-Masson染色)PAM-Masson染色能更清晰显示基底膜、免疫复合物和胶原纤维,免疫复合物和胶原纤维，免疫复合物的定位更为准确。1.需要试剂①1%过碘酸；②六胺银液；③苏木素染液；④氨水;⑤Masson液；⑥1%亮绿液。2.具体操作步

3、骤(1)切片常规脱蜡入水。(2)入1%过碘酸氧化10~15min,水洗5mino(3)入六银胺液72°C染30〜50分钟，以显微镜下见基底膜呈黑色即可。(4)加2%氯化金数滴于组织，5%硫代硫酸钠洗。(5)苏木素染细胞核r2min,1%盐酸乙醇分化，氨水返蓝。(6)入Masson液约lOmin,1%醋酸洗。(7)入1%亮绿5~8min,1%醋酸洗。(8)梯度乙醇脱水，二甲苯透明，树胶封片。3.染色结果基底膜及系膜基质黑色，免疫复合物红色。3.注意事项(1)组织切片的脱蜡步骤应彻底，否则组织无法着色。(2)染色时间与室温和切片厚度有关，室温

4、低、切片厚需染色时间长，反则需染色时间短。入六胺银液染色的时间需严格控制。时间过长基底膜着色过深，时间过短基底膜着色淡。(1)2%氯化金分化吋间要短，吋间长容易使银染褪色。(2)染色后的组织切片耍将组织四周的污染物痕迹擦掉。(三)马松染色(Masson染色)Masson染色能显示各部位的免疫复合物，肾小球硬化和肾小管纤维化程度。1.需要试剂①苏木素染液；②氨水；③Masson液;④1%亮绿液。2.具体操作步骤(1)石蜡常规脱蜡入水。(2)媒染剂(10%重珞酸钾、10%三氯醋酸等量混合)染10~30min,水洗。(3)苏木素染细胞核1〜2m

5、in,水洗。(4)入1%盐酸乙醇分化数秒，水洗，氨水返蓝数秒，水洗。(5)入Masson液约lOmin,水洗，1%醋酸洗。(6)入2.5%磷钩酸约30s,水洗，1%醋酸洗。(7)入橘黄G约2min,水洗，1%醋酸洗。(8)入1%亮绿5飞min,1%醋酸洗。(9)入100%乙醇脱水、二甲苯透明、树胶封片。3.染色结果细胞核红色，胶原纤维绿色，免疫复合物红色。4.注意事项(1)组织切片的脱蜡步骤应彻底，否则组织无法着色。(1)入Masson液染色吋间需严格控制。吋间过长着色过深，时间过短着色淡。(2)入亮绿染色吋间需要严格控制，吋间长容易覆盖

6、Masson液红色。(3)染色后的组织切片要将组织四周的污染物擦掉。(四)刚果红染色在肾脏病理染色中，刚果红染色能够将dia淀粉样物质染成砖红色，是诊断淀粉样变肾病的常用染色方法之一。1.需要试剂①高猛酸钾-硫酸液；②苏木素染液；③氨水；④碱性刚杲红液。2.具体染色步骤(1)切片常规脱蜡入水。(2)高猛酸钾-硫酸混合处理3min,水洗。(3)5%草酸处理3min,水洗。(4)苏木素染核2min,水洗，蓝化。(5)碱性刚果红液染10~30min。(6)入100%乙醇脱水，二甲苯透明、树胶封片。3.染色结果细胞核染蓝色，淀粉样物质呈砖红色。5

7、.注意事项(1)组织切片的脱蜡步骤应彻底，否则组织无法着色。(1)碱性刚果红染色时间应镜下控制，染色液现配现用着色好。(2)染色后的组织切片要将组织周围的污染物痕迹擦掉。