特殊染色法72804561

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1、实验四特殊染色法实验目的要求了解抗酸染色法、芽胞染色法、荚膜染色法、鞭毛染色法的原理熟悉抗酸染色法、芽胞染色法、荚膜染色法、鞭毛染色法的方法以及意义实验材料与方法材料:菌种：卡介苗、蜡样芽孢杆菌培养物染液：抗酸染色液、芽胞染色液其他：玻片、接种环、酒精灯无菌生理盐水、显微镜等方法：细菌涂片的制作：涂片、干燥、固定染色：抗酸染色法、芽胞染色法油镜使用：观察染色结果并记录（一）抗酸染色法(P67)★抗酸性细菌如结核杆菌等分枝杆菌属细菌，细菌细胞壁有很多脂类物质，石碳酸复红加温染色后，其中的分枝菌酸与石碳酸复红结合成牢固的复合物，能够抵抗盐酸酒精的脱色，使菌体保留红色，故称抗

2、酸染色法。★其他非抗酸菌和组织细胞因不能抵抗盐酸酒精的脱色，被脱成无色，后经碱性美兰染色后染成兰。1、原理2、抗酸染色方法染液组成：石碳酸复红、3％盐酸酒精、碱性美兰染色方法：石碳酸复红初染3％盐酸酒精脱色碱性美兰复染染5分钟0.5-1min影响抗酸染色的关键步骤是脱色冷却后水洗水洗水洗干燥1~3min注意事项1、加温染色时：在火焰上方保持一定高度，加热至出现蒸气（注意不能使染液沸腾），如此反复2~3次（约5min）。在加热过程中要防止将染液烘干，应及时添加染液。2、脱色时：用3%盐酸酒精脱色，直到流下的液体无色为止，进行水洗。3、抗酸染色结果及意义结果：红色－－抗酸染

3、色阳性菌兰色－－抗酸染色阴性菌意义：用于鉴定分枝杆菌属细菌以及某些放线菌结核分枝杆菌（抗酸染色）结核分枝杆菌（抗酸染色）（二）芽胞染色法(P70)★芽胞是细菌在不良的环境条件下形成的休眠体。细菌能否形成芽胞以及芽胞的形状、芽胞的位置、是否膨大等特征是鉴定细菌的重要依据之一。由于芽胞壁厚，通透性差，不易着色。为了能使芽胞着色便于观察，特用芽胞染色法。其基本原理是：用着色性强的染色剂孔雀绿或石炭酸复红，在加热条件下染色，使染料不仅可以进入菌体也可进入芽胞内，进入菌体的染料经水洗后被脱色，而芽胞一经着色难以被水洗脱，当用对比度大的复染剂染色后，芽胞仍保留初染剂的颜色，而菌体和

4、芽胞囊被染成复染剂的颜色，使芽胞和菌体更易区别。1、原理2、芽胞染色方法染液组成：5％孔雀绿水溶液、0.5％番红水溶液染色方法：加数滴孔雀绿染液于涂片上待玻片冷却后水洗番红染液复染微火加热至染料冒蒸汽用缓流自流水冲洗维持5分钟至流出水无色水洗干燥2min注意事项1、加温染色时应及时添加染液，防止染液干涸。2、进行水洗时，用细水流冲洗菌膜上方，让水流淌过菌膜，避免将菌膜冲掉。3、芽胞染色结果及意义结果：芽胞－－绿色菌体及芽胞囊－－红色意义：用于观察芽胞的形态特征以及鉴定细菌。破伤风芽胞梭菌（三）鞭毛染色法★鞭毛是细菌的运动器官，细菌是否具有鞭毛以及鞭毛着生的位置和数量是细

5、菌的一项重要形态特征。由于细菌鞭毛很纤细，一般不能用光镜直接观察，须用电镜。要用普通光学显微镜观察鞭毛，必须用鞭毛染色法。鞭毛染色的原理是在染色前先用媒染剂处理，使它沉积在鞭毛上，使鞭毛直径加粗，然后进行染色。1、原理2、鞭毛染色方法染色方法：Leifsion氏染色法染色液：Leifsion氏染色液制片：用记号笔在载玻片的反面将玻片分成3~4个等分区，在每个小区的一端滴一小滴菌液，将玻片倾斜，让菌液流到另一端，用滤纸吸去多余的菌液。室温或37℃温室自然干燥。鞭毛染色过程加Leifsion氏染色液于第一区染数分钟干燥镜检加Leifsion氏染色液于第二区加Leifsion

6、氏染色液于第三、四区染数分钟整个玻片表面都出现铁诱色沉淀、染料表面现出金色膜直接用水轻轻冲洗（不要先倾去染液再冲洗）10分钟3、鞭毛染色结果及意义结果：菌体－－红色鞭毛－－红色意义：观察鞭毛的形态特征以及可鉴定细菌。四、荚膜染色法1.实验原理：某些细菌生长到一定阶段，在一定条件下会向细胞壁外分泌一层粘性的多糖类物质——荚膜。由于荚膜与染料间的亲和力弱，不易着色，通常采用负染色法染荚膜，即设法使菌体和背景着色而荚膜不着色，从而使荚膜在菌体周围呈一透明圈。由于荚膜的含水量在90%以上，故染色时一般不加热固定，以免荚膜皱缩变形。产气荚膜杆菌肺炎链球菌2、荚膜肺炎链球菌（荚膜）

7、实验安排每人制备芽孢染色和抗酸染色各一张，油镜观察，记录结果。完成实验报告一份，可以写在一起。清理自己桌面。值日生打扫卫生。