以双向电泳为基础的肺癌组织差异蛋白分析策略

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1、以双向电泳为基础的肺癌组织差异蛋白分析策略靳胜　张曼张秀敏　许华林　张敏　郝林　（北京世纪坛医院临检中心，北京，100038）【摘要】背景与目的：肺鳞状细胞癌的癌变是一个多基因参与、多阶段的复杂过程，但癌变机理仍不清楚，应用蛋白质组学技术研究此过程有可能识别癌变相关蛋白质，对揭示肺鳞癌癌变机制具有重要的意义。本研究的目的是优化肺鳞癌组织的蛋白质样品制备方法，并建立蛋白图谱进行差异分析，为鉴定肺鳞癌癌变相关蛋白质奠定基础。方法：收集、筛选癌组织标本以及癌外周组织标本。裂解纯化总蛋白质，应用固相PH双向凝胶电泳分离组织的总蛋白质，凝胶考马斯亮

2、蓝显色后，用PDQuest软件分析图谱，比较差异表达蛋白质。用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱得到相应的肽质指纹图谱（PMF），然后搜索数据库鉴定部分差异蛋白质。结果：获得了分辨率高、重复性好的双向电泳图谱，平均蛋白质匹配率达76%，蛋白质点在位置上有较好的重复性，不同胶间蛋白质点在IEF方向偏差是（0.96±0.27）mm，SDS-PAGE方向偏差是（1.23±0.22）mm，并且得到了若干与细胞增生、分化、周期调控信号转导或肿瘤发生等有关的蛋白质。。结论：建立了肺鳞状细胞癌组织的双向电泳检测方法，为进一步构建其蛋白质表达数据库以及研究

3、其的蛋白表达图谱，并在此基础上进行差异蛋白显示比较，为进一步探讨癌变机理及筛选其特异性分子标志物打下方法学基础。关键词：双向电泳肺鳞状细胞癌组织蛋白质组ThedifferentProteomAnalysisofHumanlungcancertissuesonthebasisof2-DEJINSheng,ZHANGMan，ZHANGXiu-min,XUHua-lin,ZHANGMin,HAOLin（CenterofclinicallaboratoryofBeijing　ShijiatanHospital，Beijing100038，Chin

4、a）　　Abstract:Backgroundandobjective:Thisstudywasdesignedtoestablishandoptimizethetwo-dimensionalgelelectrophoresis(2-DE)fortheproteomeanalysisofhumanlungsquamousCarcinomas,andestablishthetwo-dimensionalgelelectrophoresis(2-DE)profileofnormalandcarcinomatissues.Thebasicaim

5、isto　performdifferential　analysisandprovideabasisforidentifyingcarcinogenesis-associatedproteinofhumanlungsquamousCarcinomas.METHODS:Afterobtainingsamplesofthenormalandcarcinomatissues,Aseriesofmethods,Suchassamplepreparation、electrophoresisparameters、gelconcentration、PDQ

6、uest2DEanalysissoftware,peptidemassfingerprint(PMF,MALDI-TOF-MS)wereusedtoanalysisthesetissues.RESULTSandCONCLUSIONS:Thegood2DEpatternsofdifferenttissuesincludingresolutionandreproducibilityareobtained.AftercoomassieBrilliantBlueR-250staining,theaveragematchingratewas76%.

7、Therewasagoodreproducibilityofspotpositionin2DEmap,withaveragedeviationinIEFdirectionof0.98±0.26mm,and1.23±0.22mminSDS-PAGEdirection.The2-DEpatternswithgoodqualityhavebeenobtained.Tenproteinspotschosenrandomlyfromdifferentstages作者简介：靳胜，河南开封市人；硕士研究生，主管技师，发表论文多篇，研究方向：肿瘤的多药耐

8、药机制及其逆转。电话：（010）63929391，Email：js14446@yahoo.com.cn通信作者：张曼，电话：（010）63929389，Email：manzhang1962@y