人结肠癌细胞株cw-2干细胞富集方法的比较

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1、人结肠癌细胞株CW-2干细胞富集方法的比较刘美，李少林，陈宓，李小青，龙浩（400016重庆，重庆医科大学基础医学院放射医学教研室）[摘要]目的比较3种细胞分选方法对人结肠癌细胞株CW-2干细胞的富集效率，探讨获得肿瘤干细胞的有效方法。方法采用单纯无血清悬浮培养、无血清悬浮培养＋奥沙利铂、无血清悬浮培养＋奥沙利铂＋流式细胞术（多重联合）分别富集人结肠癌细胞株CW-2干细胞；应用流式细胞术、NOD-SCID小鼠致瘤实验和Transwell侵袭实验比较3种方法的富集效率。结果无血清悬浮培养细胞、无血清悬浮培养＋奥沙利铂处理细胞和多重联合分选细胞中具有结肠癌干细胞

2、特性的CD44[基金项目]国家自然科学基金（30970843）EPCAM[通信作者]李少林，电话：（023）68485007，E-mail:shaolinli202@sina.com细胞，分别为57.39%、73.85%、89.57%；分别测量不同时间点（4.、7、9、14、21、28d）各组小鼠成瘤情况，多重联合分选细胞接种NOD-SCID小鼠后成瘤时间早、瘤体增长速度快，各时间点体积分别为（209.25±31.54）、（500.00±72.90）、（852.75±157.51）、（2280.00±440.91）、(4897.00±1154.15)、（11

3、070.00±3559.86）mm3，与无血清悬浮培养细胞、无血清悬浮培养＋奥沙利铂处理细胞的成瘤能力差异有统计学意义（P＜0.05）；单纯无血清悬浮培养细胞、无血清悬浮培养+奥沙利铂处理细胞和多重联合分选后细胞接种72h后穿过人工基底膜的细胞数分别为（98±7）、（135±7）、（188±6）个/视野，3组之间差异有统计学意义（P＜0.05）。故3种分选方法所获得细胞中干细胞含量由高到低为：多重联合分选后细胞、无血清悬浮培养＋奥沙利铂处理细胞、单纯无血清悬浮培养细胞。结论多重联合法富集肿瘤干细胞的效果明显强于单纯无血清悬浮培养和无血清悬浮培养＋化疗药物法，

4、是获得肿瘤干细胞较好的方法。[关键词]肿瘤干细胞；结肠肿瘤；流式细胞术；细胞分离；细胞培养技术[中图分类号]R735.3+5；R73-35+1；R73-35+2[文献标志码]AComparisonofmethodsoftheisolationcoloncancerstemcellsfromhumancoloncancercelllineCW-2LiuMei,liShaolin,ChenMi,LiXiaoqing,LongHao(DepartmentofRadiationMedicine,FacultyofBasicMedicalSciences,Chongq

5、ingMedicalUniversity,Chongqing400016)[Abstrat]ObjectiveToinvestigatetheeffectivemethodofenrichingtumorstemcellsbycomparisontheefficiencyofthreecellisolationmethods.MethodsCW-2stemcellswereenrichedwiththreedifferentmethodswhicharesimpleserum-freemedium,serum-freemediumcombinationwit

6、hoxaliplatin，mult-combination;andthenanalyzeandcomparetheenrichmentefficiencyofthethreemethodswithflowcytometry,tumorigenicityassayinNOD-SCIDmiceandTranswellinvasionassayinvitro.ResultsThefrequencysofCD44+EPCAM+cells[1]were57.39%、73.85%、89.57%separatelyincellsenrichedbysimpleserum-

7、freemedium,serum-freemediumcombinationwithoxaliplatinandmult-combination;Thetumorxenograftofcellsenrichedbymulti-combinationwereformedearliestandgrowthfastestthanthetumorxenograftofcellsenrichedbypureserum-freemediumandserum-freemediumcombinationwithoxaliplatin.Thevolumeoftransplan

8、tationtumorofcellsenriched