甲硫哒嗪对人结肠癌干细胞的作用研究

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1、甲硫哒嗪对人结肠癌干细胞的作用研究Studyontheeffectofthioridazineonhumancoloncancerstemcells作者姓名:宫萍专业名称:生物医学工程指导教师:王毅教授学位类别:医学硕士答辩日期:2015年5月25日中文摘要肿瘤干细胞是肿瘤中数量较少但生命力很强的细胞,它抵抗化疗和放疗,不易被定位,还可分化成新的肿瘤细胞,导致癌症复发。因此,杀伤肿瘤干细胞已成为癌症治疗的重点和难点。结肠癌在西方国家占肿瘤死亡率的第二位,我国结肠癌发病人数也呈逐年上升趋势。结肠癌的病变位置隐蔽,早

2、期症状不明显,容易被患者忽略,且预后多复发,复发后多产生耐药。因此,寻找有效的治疗方法十分重要。肿瘤干细胞的发现为结肠癌的治疗开辟了新的道路。甲硫哒嗪是一种吩噻嗪类药物,最早以抗精神分裂作用为人熟知,近年来文献报道,其亦可作为抗肿瘤药物,作为多巴胺受体拮抗剂,抑制D2家族DR受体,阻断DR信号通路,产生抗血癌肿瘤干细胞的作用,具有安全性高,毒副作用小等优点。另有文献报道,甲硫哒嗪通过靶向抑制血癌干细胞、胃癌干细胞及乳腺癌干细胞等多种肿瘤细胞的增殖,诱导凋亡,发挥抗肿瘤的作用,但对于结肠癌干细胞的研究甚少。本研究利

3、用免疫磁珠法从结肠癌肿瘤细胞HCT116中筛选出表面标记为++EpCAMCD44的结肠癌干细胞,并通过诱导分化、单细胞克隆、细胞免疫化学以及干细胞特异性基因表达的检测等方法进行鉴定。利用CCK8法检测甲硫哒嗪对结肠癌干细胞增殖的影响。通过AO/EB荧光双染法、线粒体膜电位法、Annexin-V-FITC双染法及流式分析等方法评价甲硫哒嗪对结肠癌干细胞的影响。++结果显示,筛选所得的EpCAMCD44HCT116在无血清培养基中逐渐形成微球,悬浮生长,经含血清培养液诱导后,细胞微球呈现贴壁生长状态。甲硫哒嗪可抑制结

4、肠癌干细胞的增殖,并存在剂量依赖性,在浓度1μmol/L时,有轻微的促进增殖作用。在甲硫哒嗪的作用下,随着浓度的增加,结肠癌干细胞成球能力逐渐下降;AO/EB结果提示甲硫哒嗪的浓度越高,细胞凋亡程度越大;Annexin-V-FITC双染法提示,凋亡早期细胞比例随着甲硫哒嗪浓度的增加也随之增大;JC-1结果显示线粒体膜电位降低,并且甲硫哒嗪的浓度越高,凋亡细胞所占比例越大;Q-PCR检测结果提示促凋亡基因Bax表达上调,抗凋亡基因Bcl-2表达下调;IWesternBlot结果提示甲硫哒嗪引起的凋亡是通过Caspa

5、se途径实现的,且Caspase3的表达随着药物浓度的增加而发生变化。综上所述,甲硫哒嗪可抑制结肠癌干细胞的增殖,诱导结肠癌干细胞凋亡;本研究为靶向作用肿瘤干细胞的药物开发奠定了实验依据,为结肠癌治疗的研究奠定了实验基础。关键词:甲硫哒嗪,肿瘤干细胞,结肠癌,凋亡IIAbstractItisknownthatCSCsconstituteonlyasmallpercentageoftumorcellswithinatumolormasscontainingheterogeneouspopulationoftumol

6、orcellswithinthetumolormicroenvironment.CSCsarelong-livedandresistanttochemo-radiationtherapy.Theyarereluctanttolocateandgiverisetouncontrolledamplificationofdifferentiatedcellpopulationsandcontributetotumorrecurrence.Therefore,thedevelopmentofstrategiesforta

7、rgetederadicationofCSCsrepresentanimportantanddifficultpointincancerresearch.Coloncanceristhesecondleadingcauseofcancerrelateddeathinwesterncountries,andthemortalityrateforthiscancerhasincreasdinourcountryrecently.Itappearsthattumorrecurrence/relapseoccursalt

8、houghwithgooddiagnosis,andbecomesresistanttochemotherapeuticagents.Itisnoteasytolocatethelesionsitebecauseoftheslurofearlysymptom,thedevelopmentofeffectivemethodsforcoloncancerisurgentlyn

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