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《丙型肝炎病毒核心蛋白对wnt信号抑制因子sfrps甲基化修饰的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、丙型肝炎病毒核心蛋白对Wnt信号抑制因子SFRPs甲基化修饰的影响陈庆美，刘娇，周帆，单晓亮，陈林林，权会琴，唐霓（400016重庆，重庆医科大学附属第二医院病毒性肝炎研究所，感染性疾病分子生物学教育部重点实验室）[摘要]目的探讨丙型肝炎病毒核心蛋白是否通过对Wnt信号抑制因子SFRPs的甲基化修饰，从而活化Wnt信号通路。方法将编码HCV核心蛋白的腺病毒（AdCore）或GFP对照腺病毒（AdGFP）感染SMMC-7721细胞，采用逆转录PCR(RT-PCR)方法检测SFRPs基因mRNA的表达；用5-氮杂-2′-脱氧胞苷（DAC）对AdCore或AdG
2、FP腺病毒感染的SMMC-7721进行去甲基化处理，进一步采用甲基化特异性PCR(MSP)和DNA甲基化测序，检测SFRPs基因启动子区CpG岛的甲基化程度，Westernblot检测甲基化转移酶Dnmts的表达。结果在HCV核心蛋白过表达的SMMC-7721细胞系中，SFRP2和SFRP5基因mRNA的表达量与对照组相比明显降低（P<0.05）；甲基化分析结果表明：SFRP5基因启动子区CpG岛呈现高甲基化修饰；甲基化转移酶Dnmt1，Dnmt3a表达量增加（P<0.05）。结论HCV核心蛋白可以促进SFRP5基因启动子区CpG岛的甲基化修饰，参与HCV
3、相关疾病的发生。[关键词]丙型肝炎病毒；核心蛋白；SFRPs；甲基化修饰;肝癌 细胞系,肿瘤[中图法分类号]R512.6+3[文献标志码]AMethylationmodificationofWntinhibitorSFRPsbyHepatitisCcoreproteinChenQingmei,LiuJiao,ZhouFan,ShanXiaoliang,ChenLinlin,QuanHuiqin,TangNi(TheSecondAffiliatedHospitalandtheKeyLaboratoryofMolecularBiologyofInfection
4、DiseasesdesignatedbytheChineseMinistryofEducation,ChongqingMedicalUniversity,Chongqing,400016,China)[Abstract]ObjectiveToinvestigatetheeffectofhepatitisCcoreproteinonmethylationmodificationofSFRPgenes.MethodsHepatomacelllineSMMC-7721wasinfectedwithAdCoretodevelopaninvitroover-expr
5、essionmodel.At36hrsafterinfection,themRNAexpressionlevelofSFRPgenesweredetectedwithreversetranscriptasePCRmethodsincore-expressingSMMC-7721cells.Cellswerefurtherdemethylatedby5-aza-2'-deoxycytidine(DAC)for72hrs,andtheninfectedwithAdCoreorAdGFPfor48hrs.MethylationmodificationofCpGi
6、slandswithinSFRPspromoterregionwereassayedbymethylationspecificPCR(MSP)andbisulfitesequencinganalysis.Inaddition,theexpressionlevelofmethyltransferaseDnmt1andDnmt3aweredetectedbyWesternblotmethod.ResultsmRNAexpressionlevelofSFRP2andSFRP5geneweresharplyreducedincore-expressingSMMC-
7、7721cells.MethylationanalysisindicatedthatHCVcoreproteininduceshypermethylationofCpGislandswithinSFRP5promoterregions.Moreover,thismodificationwaspartiallymediatedbyDNAmethyltransferaseDnmt1andDnmt3a.ConclusionHCVcoreproteincaninducehypermethylationinSFRPgenes,whichplaysanimportan
8、troleinthepathogenesisofhepatocel
