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1、RNA干扰DC-SIGN表达对树突状细胞成熟及功能的影响王建军郭述良李兰邬亭亭（400016重庆，重庆医科大学附属第一医院呼吸内科）[摘要]目的研究慢病毒介导RNA干扰DC-SIGN分子表达及干扰后对树突状细胞（dendriticcells,DCs）成熟度及功能的影响。方法分离健康人外周血单核细胞，用GM-CSF和IL-4刺激诱导DCs。培养第四天分三组即RNA干扰组、阴性对照组和空白对照组，按实验设计加入病毒共孵育12h后换液，继续培养60h后用荧光显微镜观察转染效率及荧光强度，培养第六天加LPS刺激成熟。第七天收集细胞做RT-PCR检测DC-SIGNm
2、RNA水平，WesternBlot检测DCs总DC-SIGN蛋白表达水平，流式细胞仪检测DCs表面DC-SIGN水平，ELISA检测DCs培养上清液中IL-12,IL-10水平，混合淋巴细胞反应检测DCs对CD4+T淋巴细胞刺激增殖能力的影响。结果①荧光显微镜显示感染复数（MOI）为20时，DCs感染病毒的效率达85％。②RT-PCR证实RNA干扰后DC-SIGNmRNA表达水平(0.2525±0.1396)显著低于另两组(0.5722±0.1909),(0.5487±0.1193),差异有统计学意义(F=8.142,P<0.05)。③WesternBlo
3、t检测干扰组DCs内总DC-SIGN水平(0.3237±0.0570)显著低于另两组(0.590±0.014),(0.578±0.023)，差异有统计学意义(F=51.376,P<0.05)。④流式细胞仪检测干扰组DCs表面表达DC-SIGN水平（43.10±10.12）%显著低于另两组（73.05±8.11）%,（74.49±5.56）%，差异有统计学意义（F=14.19,P<0.05）。⑤各组间成熟标志物HLA-DR及CD86差异无统计学意义（P>0.05）。⑥ELISA结果显示各组DCs培养上清液中IL-10,IL-12水平差异无统计学意义（P>0.
4、05）。⑦混合淋巴细胞反应结果显示各组DCs诱导CD4+T淋巴细胞增殖能力差异无统计学意义（P>0.05）。结论慢病毒介导的RNA干扰能有效的抑制DCs表面DC-SIGN分子表达，抑制DC-SIGN表达对DCs成熟度及DCs功能无影响。[关键词]树突状细胞；慢病毒载体；RNA干扰；DC-SIGN；CD4+T细胞；结核病[中图法分类号]R392.12[文献标志码]AToestablishthetechnologyofLentivirus-mediatedRNAinterferenceofDC-SIGNexpressionWangJianjun,GuoShul
5、iang,WuTingting,Lilan.（DepartmentofPulmonaryMedicine,TheFirstAffiliatedHospitalofChongqingMedicalUniversity,Chongqing400016,China.）[Abstract]ObjectiveToresearchLentivirus-mediatedRNAinterferenceofDC-SIGNexpressionandtheinfluenceofthematurityandthefunctionofdendriticcellswheninterf
6、ered.MethodsTheperipheralbloodmononuclearcellswereobtainedfromhealthyindividuals,andwerethenculturedinmediumwithGM-CSFandIL-4.Fourdayslater，cellswereseparatedtothreegroupssuchasRNAinterferencegroup,negativecontrolgroupandblankgroup.Accordingtodesign,themediumwaschanged12hourslater
7、.Theefficiencyofinfectionwascalculatedbyfluorescencemicroscopeandfluorescenceintensitywasobserved60hourslater.Sixdayslater,LPSwasaddedtostimulateDCstomature.Sevendayslater,thecellswerecollected,andthelevelofDC-SIGNmRNAwasdetdectedbyRT-PCR.ThetotallevelsofDC-SIGNinDCsweremeasuredby
8、WesternBlot.ThelevelofDC-SIGNonth
