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1、RNA干扰抑制MyD88表达对小鼠骨髓树突状细胞生物学活性的影响论文.freelurinemyeloiddendriticcellsAbstractAIM:ToinvestigateinhibitoryeffectsofRNAinterferenceonMyD88expressioninmurinemyeloiddendriticcells(DCs)anddetectthebiologicalactivityofDCs.METHODS:Threepairsofmyeloiddifferentiationfactor88(MyD88)
2、siRNAate.ThemRNAandproteinexpressionofMyD88iquantifiedRTPCRandouseDCsg/Letryandmixedlymphocytereaction(MLR).TheconcentrationofTNFα,IFNγandIL12inthesupernatantmunochemistry.RESULTS:mRNAandproteinexpressionulationincreasedtheexpressionofCD80,CD86andMHCⅡinthecytomembraneo
3、fDCs,theconcentrationofTNFα,IFNγandIL12inthesupernatantincontrolgroup.Besides,LPSstimulationpromotedtheshiftofNFκBtokaryonandtheproliferationofallogeneicTcellsincontrolgroup.RNAinterferenceinhibitedtheseeffectsinducedbyLPS.CONCLUSION:RNAinterferencecanreduceMyD88expres
4、sioninmurinemyeloiddendriticcellsandinhibitthematurationofDCs,ayprovideaneRNA和蛋白质水平检测DCMyD88的表达情况,筛选其中一对高效RNA（序列3）转染DC2.4细胞（RNA干扰组）,以未转染RNA的DC2.4细胞作为对照组,分别给予1mg/L的脂多糖（LPS）刺激。流式细胞术（FCM）检测DC细胞表面CD80、CD86及MHCⅡ分子的变化,ELISA法检测DC分泌肿瘤坏死因子α（TNFα）、干扰素γ(IFNγ)和白介素12（IL12）的浓度,免疫细胞化
5、学检测DC核因子κB（NFκB）的表达,混合淋巴细胞培养检测T细胞增殖能力,观察RNA干扰对LPS促DC成熟的影响。结果:与空白对照组相比,序列2组及序列3组DC的mRNA和蛋白质表达分别降低90%和85%、92%和88%,差异有统计学意义;脂质体对照组、无义siRNA对照组及序列1组DC的mRNA和蛋白质表达无显著差异。经LPS刺激后,与对照组相比,RNA干扰组CD80、CD86及MHCⅡ分子的表达,TNFα、IFNγ及IL12的浓度及T细胞增殖能力均显著下降,且未见明显NFκB核转位。结论:RNA干扰技术能显著下调小鼠DCMyD
6、88的表达,并显著抑制LPS促DC成熟的效应,为以DCMyD88为靶向、相关疾病的基因治疗提供了新思路和手段。关键词树突状细胞;MyD88;RNA干扰;脂多糖树突状细胞(dendriticcell,DC)是体内功能最强的抗原提呈细胞(antigenpresentingcell,APC),又是惟一能活化初始型T细胞的APC1。它活化初始T细胞的能力依赖其成熟状态。最近研究表明,Toll样受体（TLR）及其信号途径在调控DC的成熟过程中起重要作用,是联结固有免疫和适应性免疫的桥梁2,参与了炎症、肿瘤、自身免疫性疾病及移植排斥反应等多种病
7、理生理过程。髓样分化因子88（myeloiddifferentiationfactor88,MyD88）是TLR信号传导过程中重要的转载分子,它的缺陷可导致TLR信号传导中断,以MyD88为靶向阻断TLR信号通路可能为治疗上述疾病提供新方法。RNA干扰（RNAinterference,RNAi）是新近发现的基因技术,可通过双链RNA(dsRNA)介导特异性地降解相应序列的mRNA,从而导致转录后的基因沉默,现今被广泛应用于基因功能研究3,4,同时在肿瘤、病毒性疾病、心脏病和糖尿病的基因治疗方面具有广阔的前景。我们针对Toll样受体信
8、号途径中的衔接分子MyD88,应用RNA干扰技术干预,观察其对DC表达MyD88的影响,旨在设计并获得能够特异下调MyD88基因表达的小干扰RNA（smallinterferenceRNA,siRNA）,并进一步观察其对小鼠骨髓DC生
