小鼠骨髓来源未成熟树突状细胞蛋白表达的分析

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1、小鼠骨髓来源未成熟树突状细胞蛋白表达的分析易发平，焦庆昉，符少月，卜友泉，刘革力，宋方洲（重庆400016，重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室，分子医学与肿瘤研究中心）[摘要]目的利用双向电泳和质谱技术对小鼠骨髓来源未成熟树突状细胞（dendriticcells，DC）表达的蛋白质进行分析。方法IL-4和GM-CSF诱导未成熟DC的分化，提取细胞总蛋白，定量。双向凝胶电泳分离蛋白质组分，胶体银染显色，PDQuest进行图像分析后选取蛋白点，胶内酶解后MALDI-TOFMS进行肽指纹图谱鉴定，MS-Fit分析质谱数据。结果细胞生长情况和表面标志物检测表明获得了高纯度的未成

2、熟DC。图像分析结果显示，DC中检测到了（660±10）个蛋白点，主要分布在相对分子质量28×103～100×103，等电点5.0～9.0之间。鉴定了87个蛋白点，其中与未成熟DC免疫调节功能相关的蛋白质有40个（45.98%）；与大分子代谢相关的有37个（42.53%）。结论成功分离到了约660个小鼠骨髓来源未成熟DC表达的蛋白质，鉴定出了其中87个蛋白。[关键词]树突状细胞；蛋白质组；双向电泳；肽指纹质谱[中图法分类号][文献标志码]ATheanalysisofproteinexpressioninmousemyeloiddendriticcellsYiFaping，JiaoQi

3、ngfang，FuShaoyue，BoYouquan，LiuGeli，SongFangzhou（DepartmentofBiochemistryandMolecularBiology，MolecularMedicineandCancerResearchCenter；ChongqingMedicalUniversity，Chongqing40016，China）[Abstract]ObjectiveToaffordexperimentalproofforapplicationofdendriticcells（DC），theprotein，expressedinimmatureDCder

4、ivedfrommousemyeloid，wereseparatedby2-dimentionelectrophoresis（2-DE），andidentifiedbypeptidemassfingerprintingmethod.MethodsThedifferentiationofimmatureDCwereinducedbyinterleukin-4（IL-4）andgranulocyte-macrophagecolony-stimulatingfactor（GM-CSF）.TheproteinswereextractedfromtheDC，separatedby2-DE，st

5、ainedbyimprovedsilvermethod，analyzedbyPDQuestsoftware，andidentifiedbypeptidemassfingerprintingmethodandMS-Fit.ResultsThehighpureimmatureDCwereobtainedthroughdetectingCellgrowthandsurfacemarkers.660±10proteinspotsweresuccessfullyseparated.Mostofthemolecularweightofproteinwerefrom28×103to100×103，

6、andisoelectricpointfrom5.0to9.0.87spotswereanalyzed.Atotalof40proteins（45.98%）wererelatedtoimmunefunctionsand37proteins（42.53%）relatedtomacromoleculesmetabolisminDC.Conclusion660protein，expressedinimmatureDCderivedfrommousemyeloid，wereseparatedsuccessfullyand87spotswereanalyzed.[Keywords]dendri

7、ticcells；proteome；2-dimentionelectrophoresis；peptidemassfingerprintingSupportedbytheNationalNaturalScienceFoundationofChina（30800945），andNaturalScienceFoundationProjectofChongqingScienceandTechnologyCommission(2008BB5225).Correspo