mbp原核表达及其对树突状细胞表型和功能成熟的影响

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1、丛墼厦趑盍达区基盘挝塞达缉胞塞型塑边熊盛塾数整煎⑧论文作者签名：指导教师签名：论文评阅人1：评阅人2：评阅人3：评阅人4：评阅人5：』啦—罐逵率一塞童煌熬援』浙江太堂撼壹堂瞳匿垒迁阅匿名迁闼答辩委员会主席：韭童煌敛援Z进江太堂墟立堂院委员1：夏太煎熬援』逝江太堂委员2：三壹壹熬援Z逝婆态堂委员3：周盐福．剧．熬援』逝垫太堂委员4：盐旭瑷副教授』逝婆太堂委员5：浙江大学研究生学位论文独创性声明＼删本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已

2、经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得浙江大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：鸱孕签字日期：≯IP年≯月咱学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解澎姿盘堂有权保留并向国家有关部门或机构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权逝姿盘鲎可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名

3、：镌璋J导师签名：篪遵备签字目期：如、甲爷月7怕签字日期：刃，侔硼≯泊浙江大学硕士学位论文致谢致谢回顾在浙江大学学习在职研究生课程的这几年，感觉收益颇多，知识方面拓展不少，科研方面更是受益匪浅。在这里首先要感谢我的导师潘建平教授，从潘教授身上我深切感受到一位学者严谨治学的作风和诲人不倦的态度。我的日常工作和科研学术研究关系不大，因此对科研领域的新进展不是特别熟悉，而潘教授总是不厌其烦地进行指导。并从技术上给予无私的帮助，使我的课题研究能顺利进行。此外还要感谢周林福老师的支持和帮助，感谢同一届的吕棠山同学，感谢师妹辛晓丽、陈

4、鸿鹄的帮助。浙江大学硕士学位论文中文摘要MBP原核表达及其对树突状细胞表型和功能成熟的影响浙江大学医学院硕士研究生导师免疫学翁秀妹潘建平教授中文摘要背景和目的麦芽糖结合蛋白(maltosebindingprotein，MBP)是近年发现的免疫佐剂，它可提高重组亚单位疫苗的免疫原性。研究发现，MBP具有广泛的免疫活性，可激活NK细胞、巨噬细胞和1111细胞；也可通过TLR4活化DC，产生前炎症因子参与免疫。由此提示MBP可作为免疫增强剂，单独作用时也可提高机体免疫应答。DC是功能最强的专职性抗原提呈细胞(antigen．pr

5、esentingcell，APC)，是唯一能直接激活初始T细胞的专职性APC，在固有免疫和适应性免疫中均发挥着重要的作用。DC的发育分为成熟与未成熟阶段，两者具有不同的生物学特征和细胞表型。非成熟DC低表达MHC分子和CD40、CD54、CDS0、CD86等共刺激分子和粘附分子；成熟的DC高表达CD80(B7．1)、CD86(B7．2)、CD40等共刺激分子，和细胞间粘附分子ICAM．1(CD54)等。迄今，有关MBP的研究，主要集中在研究MBP融合重组蛋白的活性。然而关于MBP直接作用于免疫系统，并提高疫苗免疫应答反应的

6、机制还不清楚。所以，本课题通过构建MBP原核表达载体，表达并分离纯化MBP，在此基础上，研究MBP对DC分化和功能成熟的影响．旨在为阐明MBP作为新型免疫增强剂的分子II浙江大学硕上学位论文中文摘要机制提供新的实验依据，为疫苗佐剂的研究提供新的线索。方法1．构建MBP原核表达系统：以大肠杆菌K12DNA为模板，PCR扩增malE基因并构建其原核表达系统。采用SDS．PAGE检测目的蛋白MBP表达情况，AmyloseResin柱提纯MBP。WestemBlot鉴定MBP的免疫反应性。2．DC2．4细胞系的培养：DC2．4培养

7、于含10％FCS的RPMI．1640完全培养基(含300mg／L谷氨酰胺，100U／ml青霉素，100I-tg／ml链霉素)。3．实验分组：实验分为3组，1)空白对照组；2)1¨g／mlMBP组；3)5}tg／mlMBP组。收集DC2．4细胞，各组分别用以下方式处理：1)空白对照组，即DC2．4组；2)DC2．4+1pg／rnlMBP；3)DC2．4+5gg／mlMBP。然后将24孔板放入37。C、含5％C02的孵箱中培养10h。收集细胞和培养上清，分别用于DC表型和细胞因子浓度检测。实验重复3次。4．DC2．4表型变化的

8、检测：流式细胞术分析DC表面分子CD40、CD54、CD80、CD86、MHC．I及MHC．II表达。5．细胞因子检测：ELISA检测培养上清中细胞因子IL．1B、IL．6、IL．12及IL-23的浓度。结果1．所克隆的matE基因DNA序列与文献报道完全相同。所构建的原核表达系统能成功表达MBP蛋白。