herpesvirusentrymediatorcd160介导人调节性t细胞对cd4效应性t细胞的抑制作用

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1、HerpesVirusEntryMediator/CD160介导人调节性T细胞对CD4+效应性T细胞的抑制作用何跃，韩容，刘宏，吴雄飞（400038重庆，第三军医大学西南医院肾科）[摘要]目的研究HVEM、CD160在不同CD4+T细胞亚群，不同功能状态下的表达以及HVEM—CD160通路对CD4+CD25+调节性T细胞（RegulatoryTcell，Treg）免疫调节作用的影响。方法采用流式细胞分析术分别检测3例不同个体CD4+CD25+Tregs及CD4+CD25-T细胞在1000IU/ml人重组IL-2、与细胞数量

2、1:1的抗CD3/CD28mAb包被磁珠的刺激下第0、3、5天HVEM或CD160的表达情况。采用1.25μg/ml至5μg/ml浓度梯度的HSV1gD蛋白处理4例不同个体Treg并培养5d后将处理的Treg与Teff在体外以1：1混合并加入300IU/mlIL-2及等量抗CD3/CD28mAb包被磁珠，行混合淋巴细胞共培养，于培养结束前18h加入3H-TdR，共培养7d后检测各组细胞CPM增殖情况。5μg/mlgD蛋白处理5例不同个体Treg后将其细胞浓度调整为5×106并接种于6孔培养板内，加入500IU/mlIL-2

3、共培养7d后对其行RT—PCR(RealtimePCR)分析TregFoxp3基因表达。结果HVEM在初始CD4+CD25+Tregs表面呈中度表达，平均表达率42%，且随着Treg的活化其表达HVEM上调；CD160在初始CD4+CD25-T细胞表面呈低度表达，平均表达率仅7%，但伴随其活化，表达CD160有所上调。采用不同浓度HSV1gD蛋白处理Treg后2.5μg/ml与5μg/ml浓度组抑制CD4+CD25-T细胞增殖作用与空白对照组（276±35）相比明显下降，CPM均值分别为(2014±202)、(6535±5

4、31)，差异具有统计学意义（P＜0.05）且具有浓度依赖性，；RT—PCR分析发现Treg经5μg/mlgD蛋白处理后Foxp3基因表达率下降，仅为空白对照组的0.48倍，差异具有统计学意义（P＜0.01）。结论机体接受免疫刺激后Treg通过上调HVEM表达与CD4+CD25-效应性T细胞（EffectiveTcell，Teff）表面上调表达的受体CD160交联从而上调TregFoxp3基因的表达，最终介导了Treg对Teff活化、增殖的抑制作用，HVEM—CD160通路对Treg免疫调节作用具有重要意义。[关键词]共刺激

5、分子；CD160；HVEM；调节性T细胞；器官移植[中图法分类号]R392.45；R617HumanregulatoryTcellsexertinhibitoryfunctiononCD4+effectiveTcellsthroughinteractionbetweenHerpesVirusEntryMediatorandCD160HeYue,HanRong,LiuHong,WuXiongfei（DepartmentofNephropathy,SouthWestHospital,ThirdMilitaryMedicalUn

6、iversity,Chongqing,400038,China）[Abstract]ObjectiveTostudytheexpressionofHVEMandCD160ondifferentCD4+TcellsubsetsofdifferentfunctionstatesandtheeffectofHVEM—CD160pathwayoninhibitoryfunctionsofCD4+CD25+RegulatoryTcells(Tregs).MethodsFlowcytometrywasusedtoanalysethee

7、xpressionofHVEMorCD160aftertheselectedCD4+CD25+TregsandCD4+CD25-Tcells,from3differentsamplesrespectively,werestimulatedwithequivalentantiCD3/CD28mAbcoatedbeadsand1000IU/mlIL-20d,3dsand5dslater;Tregs,from4differentsamples,weretreatedwithincreasingdoseofHSV1gDprotei

8、n,from1.25μg/mlto5μg/ml,5daysbeforebeingaddedintomixedlyphocytereactionsystemwith300IU/mlIL-2andequivalentantiCD3/CD28mAbcoatedbeads.ThenTcellproliferat