生物技术实验2

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1、生物技术实验1、层析：一种基于被分离物质的物理、化学及生物学特性的不同，使它们在某种基质中移动速率不同而进行分离和分析的方法。2、双向电泳：将样品进行一次电泳后，再沿它的直角方向进行一次电泳，此方式称为双向电泳。一次电泳是定点聚焦电泳，二次电泳是SDS•聚丙烯酰胺凝胶电泳或SDS■聚丙烯酰胺梯度胶电泳。3、亲和层析：利用生物分子间专一的亲和力而进行分离的一种层析技术（固定相只能与一种待分离组专一结合，而和无亲和力的其他组分分离4、吸附层析：是以吸附剂为固定相，根据待分离物与吸附剂之间吸附力不同而达到分离的目的的一种层析技术5、离子交换层析：以离子交换剂为固定相，一句

2、流动相中的组分离子与交换剂上的平衡离子进行可逆交换时的结合力大小的差别而进行分离的一种层析方法6、凝胶层析：又称为凝胶排阻层析、分子筛层析、凝胶渗透层析。指混合物随流动相流经装有凝胶作为固定相的层析柱时，混合物中各种物质因分子大小不同而被分离的技术。它是以多孔性凝胶填料为固定相，按分子大小顺序分离样品中各个组分的液相色谱方法。7、分子筛原理：依据分子大小这一物理性质分离纯化的，它的固定相是惰性的珠状凝胶颗粒，凝胶颗粒的内部具有立体网状结构，形成很多孔穴，当含有不同分子大小的组分样品进入凝胶层析柱后，各个组分就向固定相的孔穴内扩散，组分的扩散程度取决于孔穴的大小和组分

3、分子大小。比孔穴孔径大的分子不能扩散到孔穴内部，完全被排阻在孔外，只能在凝胶颗粒外的空间随流动相向下流动，它们经历的流程短，流动速度快，故先流出;而较小的分子则可以完全渗透进入凝胶颗粒内部，经历的流程长，流动速度慢，故后流出。分子大小介于二者之间的分子在流动屮部分渗透，渗透的程度取决于它们分子的大小，故它们流出的时间介于二者之问。分子越大的组分越先流岀，分子越小的组分越后流出，这样样品经过凝胶层析后，各个组分便按分子从大到小的顺序依次流出，从而达到了分离的目的。应用：（1）生物大分子的纯化。（2）分子量测定。（3）脱盐及去除小分子杂质。（4）去热源物质。（5）溶液的

4、浓缩。8、凝胶的种类：（1）葡聚糖凝胶：指由天然高分子葡聚糖与其他交联剂交联而成的凝胶，主要有两类：Sephadex（由葡聚糖与甲叉双丙烯酰胺交联而成）和Sephacrylo（2）聚丙烯酰胺凝胶：是丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺交联而成。（3）琼脂糖凝胶：多糖链以氢键方式相互连接形成双链单环的琼脂糖，经凝聚即成为束状的琼脂糖凝胶。（4）聚丙烯酰胺和琼脂糖交联凝胶：由交联的聚丙烯酰胺和嵌入凝胶内部的琼脂糠组成。（5）多孔硅胶、多孔玻璃珠：将硅胶或玻璃制成具有一定直径的网孔状结构的球形颗粒。9、层析法的分类：（1）根据固定相基质的形式分类：纸层析、薄层层析、柱层析纸层析：指以

5、滤纸作为基质的层析，适用于小分子物质快速检测分析和少暈分离制备薄层层析：将基质在玻璃或塑料等光滑表而铺成一薄层，在薄层上层析。柱层析：将基质填装在管中形成柱形，在柱中进行层析一一适用于样品分析、分离凝胶层析、离子交换层析、亲和层析、高效液相色谱一一采用柱层析形式（2）根据流动相的形成分类：液相层析和气相层析气相层析：指流动相为气体的层析一一用于氨基酸、核酸、糖类、脂肪酸等小分子分析鉴定。液相层析：指流动相为液体的层析一一适用于生物样品的分析、分离。（3）根据分离的原理不同分类：吸附层析、分配层析、凝胶过滤层析、离子交换层析、亲和层析（分离生物大分子）吸附层析：是以吸

6、附剂为固定相，根据待分离物与吸附剂之间吸附力不同而达到分离的目的的一种层析技术分配层析：根据在一个有两相同时存在的溶剂系统屮，不同物质的分配系数不同而达到分离目的的一种层析技术一—（液一液层析，分配层析法）凝胶层析：又称为凝胶排阻层析、分子筛层析、凝胶渗透层析。指混合物随流动相流经装有凝胶作为固定相的层析柱时，混合物中各种物质因分子大小不同而被分离的技术。它是以多孔性凝胶填料为固定相，按分子大小顺序分离样品中各个组分的液相色谱方法。离子交换层析：以离子交换剂为固定相，一句流动相中的组分离子与交换剂上的平衡离子进行可逆交换时的结合力大小的差别而进行分离的一种层析方法亲

7、和层析：利用生物分子间专一的亲和力而进行分离的一种层析技术（固定相只能与一种待分离组专一结合，而和无亲和力的其他组分分离10、分离胶的形成：凝胶储液（6.66）、水（8.54）、分离胶缓冲液（2.50）、10%SDS（0.30）、10%过硫酸钱（0.30）、TEMED-四甲基乙二胺（加塑剂）11、不连续电泳系统的四个不连续性：（1）凝胶浓度的不连续性。（2）缓冲液离子成分的不连续性。（3）缓冲液PH的不连续性。（4）电位梯度的不连续性。存在三种物理效应：电荷效应、凝胶的分子筛效应、样品的浓缩效应。12、（NH4）2SO4硫酸铁——盐析中常用的盐（粗提）13、琼脂