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《生物选修1专题5dna和蛋白质技术导学案(高三复习)》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、课题：生物选修1专题5DNA和蛋白质技术导学案【知识梳理】（一）DNA的粗提取与鉴定1.实验原理提取生物大分子的基本思路是O对于DNA的粗提取而言，就是要利用与、等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA,去除其他成分。（1）DNA的溶解性①DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的溶液中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分离目的。②DNA不溶于溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。利用这一原理，可以将D对与蛋白质进一步的分离。（2）DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性蛋白酶能水解,但是对没有影响。大多数蛋白质不能忍受60—80七的高
2、温，而DNA在才会变性。洗涤剂能够瓦解,但对DM没有影响。（3）DNA的鉴定在条件下，DNA遇会被染成—色，因此二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。2.实验设计（1）实验材料的选取凡是含有的生物材料都可以考虑，但是使用的生物组织，成功的可能性更大。（2）破碎细胞，获取含DNA的滤液破碎动物细胞：如在鸡血细胞液中加入一定量的,同时用搅拌，过滤后收集滤液即可。破碎植物细胞（如洋葱），需在切碎的洋葱中加入一定的和,进行充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液。①加入蒸谓水作用：蒸傳水对于鸡血细胞来说是一种液体，使血细胞,再加上搅拌的机械作用，加速了鸡血细胞的破裂（细胞膜和核膜的破裂），从而释放
3、出DMA。②加入洗涤剂的作用是：洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解,有利于的释放；加入食盐的作用是：溶解。③如果研磨不充分，会使细胞核内的释放不完全，提取的DNA量变,影响实验结果,导致看不到、用二苯胺鉴定不显示等。（3）去除滤液中的杂质①方案一：利用DWV在不同浓度WC1溶液中不同，通过控制去除杂质。②方案二：根据酶的专一性，利用木瓜蛋白酶分解,而不分解；③方案三：利用DM和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使变性，与分离。（4）DNA的析出与鉴定①DNA的析岀：将处理后的溶液过滤，加入与滤液体积相等、冷却的,静置2〜3min,溶液中会出现,这就是粗提取的DM。①DNA的鉴定：将白色
4、丝状物用的NaCl溶液再溶解，加入4ml的,混合均匀后，在条件下，溶液被染成色。1.注意事项（1）以血液为实验材料时，需要加入柠檬酸钠防止（2）要提取洋葱等的DNA时，加入洗涤剂后，动作要,否则容易产生大量的泡沫，不利于后续步骤地操作。（3）加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要,以免,导致DNA分子不能形成絮状沉淀。（4）二苯胺试剂要,否则会影响鉴定的效果。（5）当NaCl溶液浓度低于0.14mol/L时，随浓度的升高，DNA的溶解度；当NaCl溶液浓度高于0.14mol/L时，随浓度升高，DNA的溶解度。（二）多聚酶链式反应扩增DNA片断1.PCR原理（2）细胞内DNA析：条件组
5、分作用模板原料酶能量引物（1）细胞内DNA复制条件分析:复制过程的解①:解旋酶、ATP,DNA两条链打开，形成两条DNA单链。②:在D"A单链3'端与DMA反向配对结合。③:DNA聚合酶与模板链结合，标志着单链合成开始。④:DNA聚合酶从引物3'端开始，将配对的脱氧核昔酸连接起来。（3）DNA分子复制的人工控制在DNA的复制过程屮，复制的前提是o在体外可通过控制来实现。①解开螺旋：在°C范圉内，DNA双螺旋打开，形成两条DNA单链，称为。②恢复螺旋：在°C左右时，两条DNA单链重新形成双螺旋结构，称为o③复制条件：（相当细胞内的核基质）；模板；分别与两条模板链相结合的;四种脱氧
6、核苜酸；酶④反应场所：（自动温度周期性调节）。2.PCR的反应过程（1）每次循环的三个步骤：①变性：在°C时DNA解旋①复性：在°C时引物与DNA单链结合②延伸：在°C时合成DNA子链（两个引物间的序列）（2）实验操作配制PCR反应体系移入放入设置PCR仪的工作参数扩增（3）操作提示①为避免外源DNA等因素的污染，PCR实验屮使用的、、—以及蒸憎水等在使用前必须进行。②PCR所用的缓冲液和酶应分装成小份，并在°C储存。使用前，将所需试剂从冰箱拿出，放在冰块上缓慢融化。③在微量离心管中添加反应成分时，移液管上的枪头要。④混匀后离心处理，使反应液集中在离心管底部。（三）血红蛋白的粗
7、提取和分离1•实验原理蛋白质的分离和提収的原理：根据蛋白质各种特性的差异，如分子的、所带电荷的_、、和—等等，可以用来分离不同蛋白质。（1）凝胶色谱法（也称）①概念：根据被分离蛋白质的,利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，来分离蛋白质的有效方法。②原理：凝胶实际上是一些由构成的多孔球体，当不同的蛋白质通过凝胶时，的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程,移动速度,而_的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在移动，路程,移动速度,相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。（2）缓冲溶液①概念：在一定的范
