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1、血清TTR的表达与结直肠癌转移的相关性研究［摘要］目的研究分析结直肠癌转移与血清转甲状腺素蛋白（TTR）表达之间的相关性。方法选择2014年1月~2015年12月间我院收治的23例结直肠癌患者进行本次研究,采集其血液样本。根据是否出现了远处转移进行分组,将其中无远处转移的样本设为对照组，共11例；发生远处转移的样本设为观察组，共12例。所有样本都采用蛋白免疫印迹方法对TTR表达进行半定量分析。结果通过计算两组样本的光密度比值,结果显示无远处转移的结直肠癌患者血清样本（对照组）中TTR的表达量更高，显著高于发生远处转移患者（观察组）血清TTR表达量，差异有统计学意义（P二
2、0.023<0.05）。结论结直肠癌患者血清TTR的表达水平与肿瘤是否发生转移有相关性，发生远处转移结直肠癌患者血清TTR表达量显著更低，在今后对结直肠癌浸润与转移水平的评估中JTR可作为一种肿瘤标志物。［关键词］血清TTR;结直肠癌；相关性；表达水平转甲状腺素蛋白（TTR）,也被称为〃前白蛋白〃，英文简称PA,是由4个相同亚基共同构成的一种四聚体,每个亚基由127个氨基酸组成z其主要功能是以转运蛋白的身份参与转运甲状腺素、视黄醇，同时TTR还能够体现体内蛋白的合成情况,当体内蛋白丢失，出现应激状态时，TTR水平会迅速下降，反之则增高［1］。由于TTR是一种甲状腺素与视
3、黄醇的转运蛋白，所以其表达情况可体现机体的营养及某些病理改变，可作为预测疾病、判断疾病预后的一项指标［2］。为此，我院选取2014年1月~2015年12月间所收治的结直肠癌住院患者进行研究，分析发生远处转移与未发生远处转移患者TTR的表达情况，现将结果报道如下。1资料与方法1.1一般资料纳入我院2014年1月~2015年12月结直肠癌住院患者23例为硏究对象,所有患者均经病理确诊，经检查均未发现其他恶性肿瘤与甲状腺代谢疾病。采集血清样本，其中11例患者未出现远处转移,12例患者伴有远处转移(均属于肝或者胃转移),患者年龄最小48岁，最大79岁，平均(69.1±3.1)岁
4、，其中男12例，女11例。全部患者于术前采集血清样本，术前均未进行放射治疗、化疗与免疫治疗，全部患者临床资料均齐全。血清样本均置于・80。(：保存，采用全自动生化仪对血清蛋白浓度进行检测。1.2方法对23例患者血清采用蛋白免疫印迹半定量检测。①吸取30pL血清标本，采用SDS-PAGE,变性温度设置为100°C,处理时间设置为18mino②电泳浓缩胶电压设置为60V,分离胶电压设置为120V。90min半干电转仪转膜,采用封闭液进行封闭，封闭液采用5%脱脂奶粉+PBST;封闭一抗，封闭液采用抗体稀释剂，TTR抗体：封闭液=1:1000Pactin抗体：封闭液二1:400
5、,在4°C下过夜；PBST:0.05%Tween+PBSz每20分钟对膜进行一次清洗，共清洗3次。封闭二抗，TTR抗体与「actin抗体分别采用山羊抗兔(LgGH+L)辣根过氧化物酶抗体与山羊抗小鼠(LgGH+L)辣根过氧化物酶抗体，其中TTR抗体:封闭液二1:1500,p-actin抗体：封闭液二1:2000，将其放置在温室摇床孵育,时间设置为90min,PBST每15分钟进行一次洗膜，共进行3次，采用DBA显色液对膜显色5min[3]o然后采用分析软件ImageJ进行条带光密度的计算和分析。1.3统计学处理采用SPSS21.0统计学软件对获得的计量资料、计数资料进行
6、统计处理，伴有远处转移组与未发生远处转移组的计量资料采用t检验，计数资料采用X2检验，显著水平95%,Pv0.05为差异有统计学意义。2结果2.1有远处转移与无远处转移组患者血清TTR的表达结果比较采集11例未发生远处转移的结直肠癌患者血清，实验以5或6例为一组,采用Westernblotting杂交实验对血清中的TTR进行测走，实验以卩-actin为内参，结果见图lo同样方法，运用杂交实验半定量分析12例发生远处转移结直肠癌患者血清中TTR表达，结果见图2。2.2远处转移与无远处转移组结直肠癌患者血清TTR半定量结果比较比较远处转移与无远处转移组结直肠癌患者血清TTR
7、与卩-actin光密度值zP-actin为参考标准”对比分析两类患者血清TTR的表达量相对变化,同时计算TTR的变化相对比率。统计学分析显示，比较发生远处转移结直肠癌患者（观察组）与未出现远处转移结直肠癌患者（对照组）血清中TTR的表达量，前者为（3.6±0.8），后者为（U.4±3.5），发生远处转移结直肠癌患者血清TTR表达量显著更低，二者差异有统计学意义（t二7.524,P二0.023<0.05）。3讨论转甲状腺素蛋白（TTR）也被称为前白蛋白（PA）,合成于肝脏与脉络丛,负责转运人体内甲状腺素、视黄醇蛋白并参与维生素A的代谢。甲状
