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1、文章编号：X盒结合蛋白1在低浓度皮质酮对巨噬细胞免疫功能调控中的作用钟河江，周建云，蒋建新，王海燕，杨策，严军，刘庆，程英(第三军医大学大坪医院野战外科研究所第四研究室，全军交通医学研究所，全军交通伤重点实验室，创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室，重庆400042)摘要：目的探讨X盒结合蛋白1(X-boxbindingprotein1,XBP1)在低浓度皮质酮对小鼠腹腔巨噬细胞免疫功能调控中的作用。方法分离培养成年健康雄性C57BL/6小鼠腹腔巨噬细胞，应用XBP1-RNAi慢病毒或阴性对照慢病毒感染小鼠腹腔巨噬细胞，采用荧光显微镜观察感染效率，感
2、染3、5d后收集巨噬细胞提取总RNA，应用RT-PCR检测小鼠腹腔巨噬细胞XBP1mRNA表达水平和干扰效率。XBP1-RNAi慢病毒或阴性对照慢病毒感染离体培养的小鼠腹腔巨噬细胞3d后，再应用低浓度皮质酮(50ng/ml)处理小鼠腹腔巨噬细胞1h，分别应用ELISA法及激光共聚焦显微镜检测小鼠腹腔巨噬细胞培养上清中TNF-α生成及其吞噬功能变化。结果当复感染指数(multiplicityofinfection,MOI)值≥6时，XBP1-RNAi慢病毒能有效地感染小鼠腹腔巨噬细胞，感染效率＞75％。应用RT-PCR检测发现XBP1-RNAi能有
3、效地抑制小鼠腹腔巨噬细胞XBP1基因表达。通过选择性地沉默XBP1基因表达，低浓度皮质酮(50ng/ml)对巨噬细胞吞噬功能增强的作用受到抑制，巨噬细胞的吞噬率和吞噬指数均显著下降(P＜0.01)，而且对TNF-α分泌增强的作用也受到抑制，显著低于阴性对照慢病毒组（）。结论采用RNA干扰选择性地沉默XBP1，能有效地抑制低浓度皮质酮对巨噬细胞吞噬和分沁功能增强的作用。关键词：糖皮质激素；巨噬细胞；RNA干扰；XBP1；免疫功能中图法分类号：文献标识码：ARoleEffectsofXBP1ointheimmunefunctionregulation
4、ofmacrophagebylow-doseconcentrationofcorticosteroneZHONGHe-jiang,ZHOUJian-yun,JIANGJian-xin,WANGHai-yan,YANGCe,YANJun,LIUQing,ChengHENGyYing(StateKeyLaboratoryofTrauma,BurnsandCombinedInjury,Department4,InstituteofSurgeryResearch,DapingHospital,ThirdMilitaryMedicalUniversity,
5、Chongqing,400042,China)Abstract:ObjectiveToexploretheeffectrolesofX-boxbindingprotein1(XBP1)ontheimmunefunctionregulationofmacrophagesbylowconcentrationofcorticosterone.MethodsPeritonealmacrophageswereisolatedfromadultmaleC57BL/6mice,andtheninfectedwithXBP1-RNAilentivirusorne
6、gativecontrollentivirus.Theinfectionefficiencywasobservedbyfluorescencemicroscopy.Miceperitonealmacrophageswerecollectedatin3threeandfive5daysafterinfectionandtotalRNAwereextracted.RT-PCRanalysiswasperformedtodetecttheeffectofRNAinterference.Furthermore,miceperitonealmacropha
7、geswereculturedinvitroandinfectedwithXBP1-RNAilentivirusornegativecontrollentivirusfor3d,andthentreatedwithlowconcentrationofcorticostereone(50ng/ml)for1h.TNF-αconcentrationinthecellculturesupernatantandphagocytosisofmacrophagesweredeterminedbyenzyme-linkedimmunosorbentassay(
8、ELISA)andconfocalmicroscopey,respectively.ResultsWhenthemultiplicity
