自身免疫性肝炎小鼠腹腔巨噬细胞功能改变及其在治疗中的作用

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1、分类号：贴7s密级：学位类别：科学学位口专业学位团圄学校代码：10062学号：201060238／学币}门类：医学又坪眚科袁号硕士学位论文论文题目：自身免疫性肝炎小鼠腹腔巨噬细胞功能改变及其在治疗中的作用TITLETheFunctionofAbdominalMacrophagesinAutoimmuneHepatitisMiceandRoleofT]hatinTreatment一级学科：临床医学二级学科：内科学消化系病论文作者：杨蜜蜜指导教师：王邦茂教授导师组成员：周璐副教授天津医科大学研究生院二。一三年五月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得

2、的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：立杰蕴日期：鹚年石月f日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密l--J，在——年解密后适用本授权书。本论文属于不保密[口。(请在相对应的方框内打“、／”)学

3、位论文作者签名：烟筮盎日期：为解导师签名：掰日期：一r声6月J日石月乙日o／天津医科大学硕士学位论文中文摘要目的：研究自身免疫性肝炎(autoimmunehepatitis，AIH)模型小鼠腹腔巨噬细胞表面抗原递呈分子MHCII、CD40表达的变化及巨噬细胞吞噬功能的改变，以及氢化可的松琥珀酸钠和复方甘草酸苷对AIH模型小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响并研究其意义，从而探讨灿H的发病机制及复方甘草酸苷对于AIH治疗作用的免疫学机制，为AIH的治疗以及复方甘草酸苷的应用开辟新的前景。方法：(1)造模：4．6周龄的雌性C57BL／6小鼠，以同种系S．100肝抗原与弗氏完全佐剂充分乳化后分别于第一天

4、及第7天两次予小鼠腹腔注射建立越H的动物模型，对照组采用同剂量的生理盐水与弗氏佐剂的混合液，并于免疫后第4周末处死小鼠；(2)提取、分离、培养小鼠腹腔巨噬细胞：提取后置培养箱培养后，用不含小牛血清的RPMI．1640培养液漂洗，然后加含小牛血清的RPMI．1640培养液在培养箱中继续培养以备用；(3)配制药物及体外细胞加药：含小牛血清的RPMI．1640培养液分别将氢化可的松琥珀酸钠和复方甘草酸苷浓度分别调配至1mg／IIll，对照组仅加入培养液，培养箱中培养30min，然后加入异硫氰酸荧光素(fluoresceinisothiocyanate，FITC)标记的大肠杆菌(escherichi

5、acoli，E．coli)共孵育；(4)巨噬细胞表面抗原递呈分子测定：加入不含FITC标记E．coli共孵育，用流式细胞仪测定抗原呈递分子MHCII及其协同共刺激分子CD40在正常小鼠及AIH模型小鼠巨噬细胞表面的表达情况，从而判断巨噬细胞的抗原递呈能力；(5)AIH小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的测定：小鼠腹腔巨噬细胞与FITC标记的E．coli共孵育1小时，用荧光显微镜检测吞噬细菌的细胞数量和吞噬细菌的总数，并用流式细胞仪检测验证吞噬细菌的细胞数量，分析AIH加药组与未加药组和对照组巨噬细胞吞噬功能的差异。结果：(1)流式细胞术检测AIH模型小鼠腹腔巨噬细胞表面抗原提呈分子MHCII表达较对照

6、组明显减低，(对照组VSAIH模型组为：0．762士0．049VS．0．362--L0．035，fl=-0．000)，两组比较差异有统计学意义；AIH模型小鼠腹腔巨噬细胞表面抗原提呈分子CD40的表达也显著低于对照组，(对照组VS．AIH模型组为：O．885士0．025VS．0．409士0．018，P=-0．000)，两组比较差异有统计学意义；(2)荧光显微镜检观察AIH模型小鼠腹腔巨噬细胞吞噬率及吞噬指数显著低于对照组(吞噬率：0．208士0．046VS．0．465土0．081，fl=0．000；吞噬指数：0．390士0．105VS．O．848+0．091，卢O．000)；氢化可的松琥珀酸

7、钠能提高AIH模型小鼠腹腔巨噬细天津医科大学硕士学位论文胞吞噬率及吞噬指数(吞噬率：0．208士0．046VS．0．428+0．073，吞噬指数：0．390-J：0．105VS．0．798士0．065)，复方甘草酸苷也使AIH腹腔巨噬细胞吞噬率及吞噬指数明显升高(吞噬率：0．178-q：0．039VS．0．375士0．094，吞噬指数：0．353+0．078VS．0．702-士0．084)，与AIH小鼠未加药