西洋参茎叶总皂甙对小鼠腹腔巨噬细胞免疫功能作用的研究论文

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1、西洋参茎叶总皂甙对小鼠腹腔巨噬细胞免疫功能作用的研究论文丁涛，尚智，温富春，张伟，张殿文，纪凤兰，徐惠波【摘要】目的：观察西洋参茎叶总皂甙对活化的小鼠腹腔巨噬细胞代谢和分泌一氧化氮(NO)、白细胞介素1(IL1)活性的影响。方法：将不同浓度的西洋参茎叶总皂甙加入体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞中，以NO试剂盒检测培养上清液中NO的含量.freela公司产品；二甲基亚砜(DMSO)广东汕头西陇化工厂产品；RPMI1640培养基，美国GIBCO公司产品；小牛血清(NBS)北京鼎国生物技术发展中心提供；NO试剂盒由南京建成生物工程研究所提供；其余试剂均为分析纯。1.3仪器酶标仪，奥

2、地利TECAN公司产品；CO2培养箱，日本SANYO公司产品；倒置显微镜，日本OLYMPUS公司产品；TU1800S型分光光度计，北京普析通用仪器有限责任公司产品。2实验方法2.1小鼠腹腔巨噬细胞的制备取小鼠6只腹部消毒后每只于腹腔内注射无血清RPMI1640培养液3ml，15min后颈椎脱臼处死小鼠，75%酒精浸泡5min，移入超净工作台，收集腹腔内液，1000r/min离心5min，弃上清，PBS平衡盐溶液洗涤细胞3次，用10%NBSRPMI1640培养液调细胞浓度至106/ml，24孔培养板每孔加细胞悬液1ml(96孔板每孔加细胞悬液100μl)，置37℃5%C

3、O2培养箱中培养4h，弃上清，用PBS平衡盐溶液洗去未贴壁细胞，培养孔内为巨噬细胞单层［2］。2.2巨噬细胞代谢试验96孔培养板巨噬细胞单层加入不同浓度试药10μl/孔，阴性对照加入PBS平衡盐溶液，每个浓度5个复孔，然后每孔加入10%NBSPRMI1640培养液100μl，置37℃5%CO2培养箱中培养24h后，每孔加MTT试剂10μl，继续培养4h，每孔加入DMSO100μl，微量振荡器振荡10min，酶标仪570nm处测吸光度A值［3］。2.3巨噬细胞产生NO的测定采用硝酸还原酶法。24孔板巨噬细胞单层，每孔加入终浓度为10μg/ml的LPS0.5ml，以激活巨噬

4、细胞，同时每孔加入不同浓度的试药1ml，每个浓度6个复孔，置37℃5%CO2培养箱中培养24h，每孔取培养上清液0.5ml待测，然后按NO试剂盒操作说明加入相应试剂，室温放置10min，分光光度计550nm波长处测定吸光度A值，根据试剂盒公式计算NO的生成量［4］。2.4巨噬细胞产生IL1的影响采用胸腺细胞增值法。24孔板巨噬细胞单层，每孔加入终浓度为10μg/ml的LPS0.5ml，以激活巨噬细胞，同时每孔加入不同浓度的试药1ml，培养48h后收获上清，得诱生的IL1粗品，-20℃保存待测。常规法制备107/ml小鼠胸腺细胞悬液，加入96孔板，每孔0.1ml，同时加

5、入不同稀释度的IL1待测上清0.1ml，终浓度2μg/ml的ConA0.1ml，每个浓度3个复孔，置37℃5%CO2培养箱中培养68h后，每孔加MTT试剂10μl，继续培养4h，每孔加入DMSO100μl，微量振荡器振荡10min，酶标仪570nm处测吸光度A值［5］。2.5统计分析采用SPSS10.0统计软件进行F检验和q检验。统计结果用(±s)表示。3结果3.1对小鼠腹腔巨噬细胞代谢的影响见表1。表1对小鼠腹腔巨噬细胞代谢的影响（略）注：与阴性对照组相比*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.0013.2对小鼠腹腔巨噬细胞产生NO的影响见表2。表2对小鼠腹腔

6、巨噬细胞产生NO的影响（略）注：与阴性对照组相比*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.0013.3对小鼠腹腔巨噬细胞产生IL1的影响结果证明西洋参茎叶总皂甙对小鼠腹腔巨噬细胞IL1活性无明显增强作用。4结论本研究结果证实，西洋参茎叶总皂苷可促进小鼠腹腔巨噬细胞代谢，进而增强腹腔巨噬细胞吞噬功能，同时可诱导小鼠腹腔细胞产生NO，说明西洋参茎叶总皂甙可活化巨噬细胞，增强巨噬细胞的吞噬能力，并产生生物活性物质，从而增强机体的免疫功能。但其具体分子生物学机制有待于进一步研究。【