成人髓核细胞特征性表达基因的筛选与验证

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1、成人髓核细胞特征性表达基因的筛选与验证李海音1，李长青2(400037重庆，第三军医大学新桥医院骨科)[摘要]目的筛选及验证成人健康髓核细胞特征性的表达基因。方法取2012年4月至2013年12月于我科行脊柱骨折内固定手术患者的髓核及终板软骨组织共13例实验标本。分别对10例标本髓核细胞和终板软骨细胞进行单层培养，提取总RNA、逆转录，进行微阵列基因芯片对比分析。通过Real-timePCR分析表达差异较大的基因在转录水平的表达。取余下3对标本经单层培养后对差异表达最大的基因进行Westernblot检测，分

2、析蛋白水平的表达。结果通过对髓核细胞和终板软骨细胞进行微阵列基因芯片分析得到15个表达差异在20倍以上的基因。随后通过对这些基因进行RealtimePCR分析，发现POTEB在两种细胞间表达差异最大。Westernblot检测证明POTEB在髓核细胞中的表达明显高于软骨细胞。结论POTEB可作为髓核组织工程种子细胞特征性的表达基因。[关键词]髓核；软骨终板；基因表达[中图法分类号]R687[文献标志码]A[基金项目]重庆市自然基金一般项目（2009BB5324）[通信作者]李长青，E-mail:changql

3、i@163.comTheSelectionandIdentificationoftheSpecificMarkerofNucleusPulposusCellLiHaiyin1,LiChangqing2(DepartmentofOrthopedics,XinqiaoHospital,ThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing400037,China)[Abstract]ObjectiveToselectandidentifythespecificcellmarkerheal

4、thyhumannucleuspulposuscell.Methods13patientswhounderwentspinefractureinternalfixationweretakenfromXinqiaohospitalduringApr.2012toOct.2013.Foreachpatient,healthynucleuspulposusandcartilageendplatewerecollected.TotalRNAextractionandretro-transcriptionwereper

5、formedin10pairsofthesamplesaftermonolayercultureofnucleuspulposuscellsandchondrocytesrespectivelyandthedifferentexpressiongeneswereanalyzedwithmicroarraygenechip.ThesamesampleswereperformedwithReal-timePCRtoevaluatetheexpressiondifferenceintranscriptionleve

6、l.Westernblotwasperformedtoidentifythegenewithgreatestexpressiondifferenceinproteinlevelwithanother3pairsofsamples.Results15geneswithgreaterthan20foldchangewereanalyzedwithmicroarraygenechip.ThenPOTEBwasfoundtobewithgreatestexpressiondifferenceinReal-timePC

7、RanditisidentifiedwithWesternblotthatitalsoexpressesmuchhigherinnucleuspulposuscellthanthatinchondrocyte.ConclusionPOTEBcanbeconsideredasthespecificmarkerfornucleuspulposuscell.[KeyWords]:NucleusPulposus,EndplateCartilage,GeneExpressionSupportedbytheNationa

8、lNaturalScienceFoundationofChina（CSTC2009BB5324）Correspondingauthor:LiChangqing,E-mail:changqli@163.com在现代社会中，腰椎退行性疾病的发病率逐渐增高，其治疗多采用外科手术。但是手术治疗可能带来各种并发症，从而进一步影响患者的生活质量。近年来，髓核组织工程技术为腰椎退行性疾病的生物治疗带来了希望。但是