油茶内参基因的筛选与油脂合成相关酶基因的表达特征分析

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1、TheSelectionofReferenceGeneandExpressionAnalysisofOilContentEnzymeGeneinCamelliaoteffeFabySONGZhiboAthesissubmittedinpartialsatisfactionoftheRequirementsforthedegreeofMasterofAgricultureForestryCultivation1nCentralSouthUniversityofForestryandTechnology498ShaoshanSouthRoad，TianxinDistrictC

2、hangshaHunan410004，ER．CHINASupervisorAssociateProfessorZHANGLinMay，2014中南林业科技大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写的成果作品，也不包含为获得中南林业科技大学或其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式表明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名：环之、彼≯14,年厂月>碍日学位论文版权使用授权

3、书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件或电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权中南林业科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于：1、保密口，在——年解密后适用本授权书。2、不保密瓯(请您在以上相应方框打“4’’)作者签名：琮名．波导师签名：刍美巾哆卜矽f卑年锕乃日汐／4年尹月研日摘要油茶(Camelliaoleifera)是我国原产的优质油料树种之一，因为所产茶油富含不饱和脂肪酸而被誉为“东方橄榄油”。优良油茶

4、品种所产的茶油中不饱和脂肪酸含量高达90％(以油酸和亚油酸为主，还含有少量的亚麻酸等高价不饱和脂肪酸)，远远高于菜油、花生油和豆油。在植物生长过程中，调控油脂合成的基因：SAD基因是调控油脂中油酸合成的关键基因；GPAT基因、LPAAT基因、PAP基因、DG■丁基因和PDAT基因是TAG合成的相关基因，其中DG么丁基因是TAG合成Kenendy途径的限速酶，而PDAT基因是TAG合成另一途径的关键基因：尉D基因主要催化多不饱和脂肪酸的合成，其中FAD2基因和FAD6基因则是调控油酸经催化生成亚油酸的关键基因，FAD3基因和FAD7基因则是调控亚油酸经催化生成亚麻酸的关键基

5、因，但它们在植物中都有多个拷贝。目前已经完成了油茶成熟种子eDNA文库以及EST文库的构建，得到了近成熟种子中油脂合成相关基因的表达丰度，并在此基础上已经完成了对SAD基因、DGATl基因、FAD2基因和FAD6基因的序列克隆。本研究主要完成了：(1)油茶不同器官／组织的总RNA提取方法：Ambion@RNA提取试剂盒+CTAB法，经琼脂凝胶电泳及分光光度计检测，所得RNA浓度高，质量好。(2)在油茶转录组数据基础上对油茶内参基因进行了初步筛选，得到可以应用于油茶种仁表达分析的内参候选基因ALB、EFla、EFlfl、ETIF3H、UBC；仅可以应用于油茶根、茎、叶表达分

6、析的候选内参基因ETIF3H，可以应用于油茶根、茎、花、叶及种仁表达分析的候选内参基因EFla。(3)油茶转录组数据和已克隆油脂合成相关基因的基础上，通过使用RT-qPCR，对优良无性系油茶品种“华硕’’中油脂合成相关酶基因的表达模式进行了研究：I．油脂合成相关酶基因在种仁内的相对表达量从高到低依次为：FAD2基因、PDAT基因、PAP基因、DGAT基因、FAD7基因、FAD6基因、SAD基因、FAD3基因、LPAAT基因、GPAT基因。其中．翱D基因、LB拟r基因、PAP基因、DGAT基因、PDAT基因及觑D基因在花后42周均出现表达高峰，这与油脂含量变化及油酸含量变化

7、规律吻合，而GPAT基因在油脂合成中的调控机制有待进一步研究；在同一时期，亚油酸和亚麻酸的含量出现下降，推测可能是因为油脂中油酸的合成速率要远远大于油酸转化为亚油酸的速率，而亚麻酸的转化速率也因此受到影响，因为FAD基因的拷贝数目很多，所以有关于FAD基因的调控机制有待进一步研究。II．采用灰色关联度法分析法对油脂合成相关基因的表达与种仁油脂含量和油脂脂肪酸成分进行关联性分析，结果显示：A．油脂合成相关基因与油茶种仁中油脂含量的灰色关联度由高到低依次为：DGAT(0．9494)、PDAT(O．8356)、尉D7(0．7716)