柑橘vc合成相关酶和erf基因的克隆与表达研究

《柑橘vc合成相关酶和erf基因的克隆与表达研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、柑橘Vc合成相关酶和ERF基因的克隆与表达分析柑橘Vc合成相关酶和ERF基因的克隆与表达分析摘要维生素C(VitaminC，Vc)是生物体中重要的抗氧化剂及辅酶因子，是人体健康和植物的生长发育中必不可少的物质：ERF(Ethylene-responsiveelementbindingfactor)是植物特有的一类转录因子，在参与植物的生长发育及调控抗逆境胁迫应答中具有重要作用。本研究以‘鄂柑二号’(CunshiuMarc．CV．EganNo．2)果肉为材料，克隆了柑橘Vc合成的五个相关基因及ERF基因；并分别测定了果实生长发育过程及环剥处理后果肉中

2、Vc的含量及合成相关的基因表达变化，以及环剥后果肉中ERF基因的表达变化。主要研究结果如下：1．从柑橘果肉中克隆得到了五个Vc合成相关的基因及ERF基因的eDNA全长：GDP．甘露糖焦磷酸化酶基因(CitGM_P)，该基因包含1086bp的ORF，编码361个氨基酸，登录号为HQ224946；GDP．甘露糖．3’，5’．差向异构酶基因(CitGMD，包含1134bp的ORF，编码377个氨基酸，登录号为HQ224947；磷酸二酯酶基因(CitGGP)，登录号为HQ224948，包含1368bp的ORF，编码455个氨基酸；．L．半乳糖．1．磷酸磷酸

3、酶基因(CitGPP)，，包含813bp的ORF，编码270个氨基酸，登录号为HQ224949；L．半乳糖脱氢酶基N(CitGDH)，登录号为HQ224950，包含954bp的ORF，编码317个氨基酸；柑橘乙烯反应元件结合因子(CitERF)eDNA全长874bp，ORF编码207个氨基酸，登录号为HM064500。这些基因的氨基酸序列与其他植物的同一基因同源性较高，且具有各自相对保守的功能结构域。2．随着果实的生长发育，纽荷尔果肉中的Vc含量逐渐上升，且基因表达结果显示纽荷尔中CitGME，CitGGP、CitGDH及CitGLDH表达总体呈现

4、上升趋势，与鄂柑二号相比具有较高的转录活性，这与两个品种间Vc的含量及变化趋势一致，橙类果肉具有较高的Vc水平可能是由于橙类具有更强的Vc合成能力。3．对成熟期的温州蜜柑进行了不同形式的环剥处理，结果表明，大枝环剥(BG)可提高果肉中Vc的含量，CitGME、CitGGP，CitGDH及CitGLDH的转录水平也显著上升；而结果枝环剥(FGD)后Vc含量降低，CitGDH和CitGLDH基因表达也明显下调，说明这些基因可能是柑橘Vc合成中的关键基因。华中农业大学2010届硕士研究生学位论文4．BG处理后柑橘果肉中CitERF的表达呈持续上升趋势，F

5、DG处理后其表达先下降后上升，与环剥后TSS的变化趋势一致，说明CitERF的表达可能受果实成熟过程中糖分积累的诱导。关键词：柑橘；Ve：ERF；基因克隆：基因表达；环剥n柑橘Vc合成相关酶和ERF基因的克隆与表达分析CloningandExpressionAnalysisofVeBiosynthesis--relatedGenesandERFinCitrusAbstractVitaminC(vc)，asawell—knownabundantantioxidantandenzymaticcofactors，playscrucialrolesinma

6、intaininghumanhealth,plantdevelopmentandstresstolerance．Ethylene—responsiveelementbindingfactors(ERFs)，aleamemberoftheAP2／EREBPgenefamilyofplanttranscriptionfactors．Theyhavebeenfoundtobemainlyinvolvedinresponsetobioticandabiotiestressesandplayaimportantroleinplantdevelopmentpr

7、ogresses．Inthepresentstudy,fivegenesinvolvedinvitaminCbiosynthesisandERFgenewereisolatedfromtheCitrusunshiu；ascorbateaccumulationandexpressionprofilesofthesegeneswereinvestigatedduringfruitdevelopinginfruitpulpof‘EganNo．2’Satsumamandarinand‘Newhall’orange．Inaddition,wealsoinve

8、stigatedtheeffectsofgirdlingoncitrusascorbateaccumulationandg