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《山大生化实验报告实验五、实验六纤维素酶活力测定、还原糖浓度》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、实验五纤维素酶活力测定(3,5•二硝基水杨酸法)实验六3,5■二硝基水杨酸法测还原糖姓名：周超同组者：刘炳煜班级：11级生命基地学号：201100140067【实验目的】1、学习用3,5■二硝基水杨酸法测定述原糖的方法2、学习川3,5•二硝棊水杨酸法测定纤维素酶活力【实验原理】1、3,5-二硝基水杨酸法测纤维素齣活力的原理纤维素酶水解纤维素，产生纤维素二糖、葡萄糖等还原糖，能将3,5■二硝基水杨酸中硝基还原成橙色的氨基化合物，利用比色法测定还原物生成虽来表示酶的活力。2、3,5-二硝垄水杨酸法测还原糖的原理述原糖在碱性条件卜•加热被氧化成糖酸及其他
2、产物，3,5■二硝基水杨酸则被还原成棕红色的3■氨基・5■硝基水杨酸。在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈橘红色，在540nm处有最大吸收，在一定的浓度范围内还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利川比色法可以测定样品中还原糖的含量。【实验材料】一、器材比色管、水浴锅、电炉、分光光度计、容量瓶100ml、烧杯、移液枪二、试剂1、标准葡萄糖溶液(l.Omg/ml)：准确称取干燥悝重的窗萄糖lOOmg,溶于蒸镭水并定容至100ml,混匀,4°C冰箱中保存备用。2、3,5■二硝基水杨酸试剂：称取10克3,5•二硝基水杨酸，溶入蒸憎水中，加入20克分析纯氢氧化钠
3、，200克酒石酸钾难，加水500亳升，升温溶解麻，加入重蒸酚3克，无水亚硫酸钠0.5克。加热搅拌，待全溶后冷却，定容至1000«升。存于棕色瓶中，放置一周后使用。3、0」摩尔PH4.5醋酸-醋酸钠缓冲溶液4、0.5%竣甲基纤维索钠(CMC)水溶液，溶解后成胶装液，潍置过夜，使用前摇匀。5、西瓜汁6^酶液(l()ug/ml)一、纤维索酶活力测定(3,5・二硝基水杨酸法)1、标准曲线的绘制：分别吸収0.0,020.4,0.6,0.&1.0亳升的葡•萄糖于6支试管中(分别记为1.2.3.4.5.6）,均川蒸係水稀释至1毫升，加3,5■二硝基水杨酸显色剂3
4、毫升，在沸水浴中煮沸显色10分钟，冷却，加蒸谓水定容至25毫升，摇匀。在550nm处比色，以光密度为纵坐标，以葡萄糖微克数为横坐标，绘制标准1111线。2、样品的测定：空白管（记为A。）：取lml酶液与比色管中，沸水浴中溶5min,冷却后加3ml的0.5%CMC,与样品管同时放入水浴锅中5（）度保温30niino其他操作同样品管。样品管（记为A],A2,A3）：另取3支比色管分别加0.5%CMC3ml,酶液lml,在水浴锅中50度保温30min,取出后立即用沸水溶lOmin,冷却。加入3口13,5・二硝基水杨酸显色剂，再沸水浴lOmin,冷却后再加
5、水定容至25ml,混匀，在550nm处比色二、3,5-二硝基水杨酸法测还原糖含量1、标准曲线的绘制：分别吸取0.0,0.2,0.4,0.6,0.&1.0毫升的葡萄糖于6支试管中（分別记为123.4.5.6）,均用蒸锚水稀释至1毫升，加3,5■二硝基水杨酸显色剂3毫升，在沸水浴中煮沸显色10分钟，冷却，加蒸锚水定容至25毫升，摇匀。在550nm处比色，以光密度为纵坐标，以葡萄糖微克数为横坐标，绘制标准曲线。2、取西瓜汁3ml定容至100ml备用3、取3支比色管,分别加入0.5ml的西瓜汁、0.5ml的水和3ml显色剂,沸水浴中lOmin,冷却后加水定
6、容至25ml,混匀，在550nm处比色。【实验结果】标准曲线v=0.0577x0.0450.040.0350.030.0250.020.0150.010.005000.10.20.30.40.50.60.70.8550nm吸光值•、纤维索酶活力的测定标号1234L□6A0AlA2A3550nm吸光值00.1210.280.4340.5480.6890.040.5150.5150.496还原糖浓度(mg/ml)00.0080.0160.0240.0320.040.00230.02970.02970.0286还原糖浓度二(0.0297+0.0297+0
7、.0286)/3=0.0293mg/ml酶活力=0.0293*25*1000/(10/1000000)/30=2.44x106二、3,5-二硝基水杨酸法测还原糖含量标号123456789550nm吸光值00.1210.280.4340.5480.6890.3380.3300.358还原糖浓度(mg/ml)00.0080.0160.0240.0320.040.0200.0190.021还原糖浓度二(0.02+0.019+0.021)/3=0.02mg/ml西瓜汁中还原糖浓度二(0.02*25/0.5)*100/3=33.33mg/nil【结果分析】一
8、、纤维素酶活力的测定1、市实验结果町知，纤维索酶水解纤维索，水解产物屮有葡萄糖等还原糖，lg纤维索酶活力为2.44X106
