检定菌管理规程11

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1、检定菌管理规程目的：建立菌种管理规程，规范菌种使用、制备程序，保证验结果可靠与实验室安全。范围：木企业检验用标准菌种。职责：QC人员对本制度实施负责，实验室负责人、质量管理部对本制度有效执行承担监督检查责任。制定依据《屮华人民共和国药典》2010年版一部《中国药品检验标准操作规程》2010年版《一药品质量管理规范》2010年修订《药品质量管理规范实施指南》内容：1标准菌种的购买与接收1.1标准菌种由受过专业培训，有足够的菌种保管经验的检定菌管理员保管。检定菌管理员出一名微生物限度检验员担任。1・2.根据实验的需耍，由检定菌管理员填写《菌种申请购买单》，实验室主任审核，

2、报质量管理部门负责人批准后从当地药检所或屮国药品生物制品检定所购买。1.3收到菌种后，应核对品名，菌号数量，检查菌种管有无破损，接收同时应检查是否有随菌种附有的相关资料。填写《标准菌种接收与发放记录》。在保存菌种容器外加贴标签，注明编号、名称、购买日期。加锁保存，保藏菌种的冰箱不得存放食物和易挥发性药品。1.4标准菌株及工作菌种应按品种编号并标明代次，贴好《菌种标签》。2.标准菌种使用与保存2.1取用时，必须登记《标准菌种接收与发放记录》包括领用H期、数量及领用人等。2.2冷冻菌种一旦解冻转钟制备工作菌株后不得重新冷冻和再次使用。启用时，必须在专用净化台内严格按无菌操

3、作进行菌种传代，防止菌种被污染。2.3传代后的标准菌种为3支，一支专用于菌种传代，一支为工作用菌种，另一支为备用菌种。2.4微生物学检验人员根据检验需要，到检定菌保管员处领取工作用菌种或传代用菌种，同时填写《工作菌种使用记录》，相关内容，以便追踪菌种使用历史。3检定菌的保存3・1根据检定菌贮存条件进行贮存。新购入的0代原始菌种储存于一20°C,有效期为三年。从上级药检部门购买的己接种好的菌种斜面应检查菌种管是否完好。储存于2〜8°C,有效期为3个月。3.21作用菌种的保存3.2.1工作用菌种采用斜面低温保存法。3.2.2将菌种接种在适宜的固体斜面培养基上，待菌生长充分

4、以后，转移至4〜8°C冰箱中保存。此法仅用于工作用菌种的短期保存，并应随时检查其污染朵菌和变界等情况，发现异常悄况，经应灭活处理后销毁。3.2.3保存时间根据菌种种类而不同，细菌：1个月；酵母菌：2个月；霉菌及芽胞：3个月。3.3传代用菌种的保存：采用甘油冷冻管保藏法或液体石蜡保存法。2.3.1甘油冷冻管保存法3.3.1.1用无菌接种环轻轻刮取经冷冻复溶增菌后并接种至平板或琼脂斜面的菌苔，并通过接种环与试管壁Z间的轻轻摩擦而使细菌充分扩散到预先装入试管中的无菌纯化水中，调整菌液浓度，使其等同于10号比浊管，向已制备好的菌悬液屮加入等体积的无菌甘油（浓度20%）,即为1

5、0%甘油菌悬液,轻轻振摇，使内容物充分混合，分装于无菌小试管，在-30°C冷冻条件下保存。此甘油冷冻管为第2代（@）。可以每隔2年转种一代。使用时，取出一支放至室温，转种増菌培养或接种至琼脂斜面复苏，挑取纯菌落传代或工作用。3.3.1.2此种方法主要适用于需氧细菌和酵母菌的保藏（如大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、乙型副伤寒沙门菌）。3.3.2液体石蜡保存法3.3.2.1无菌液体石蜡的制备：选用优质化学纯液体石蜡，将液体石蜡分装加塞,用牛皮纸包好，在121°C灭菌30分钟，置40°C恒温箱中蒸发水分，经无菌检查后备用。3.3.2.2液体石蜡管的制备：将菌种穿刺接种于半固体高

6、层培养基屮，在适宜条件下培养结束后，在层流台下用无菌吸管吸取上述无菌液体石蜡至培养好的菌种管内，并使石蜡高出菌种表面约lcm使菌体与空气隔绝，并将试管直立，置于-20°C冷冻或2〜8°C冰箱中保存。3.3.2.3此法主要适用于霉菌、厌氧菌、放线菌、芽砲杆菌的保存（如枯草芽抱杆菌、白色念珠菌、黑曲霉菌等）。3.3.3各菌种的保存方法、条件及期限，见附表1《传代用菌种保存方法、保存温度、保存期限》。4标准菌种的定期检查每周检查一次保存菌种的冰箱温度、湿度，菌种管的棉塞是否松动、生霉，检查菌种外观及干燥状态。如有异常及时处理，并填写《菌种检查记录》。检定菌菌种的传代因冻干菌

7、（标准菌种）与传代用菌种而不完全相同。5.1标准菌种的复苏、确认、传代5.1.1标准菌种的复苏5.1.1.1把冻干菌种管、灭菌毛细滴管（51）、双碟、镶子、营养肉汤培养基（或其它适宜培养基）数支，移入洁净工作台。5.1.1.2将冻干菌种管外壁用碘酒擦洗消毒，稍干，用砂轮在安咅瓦上部1/3处划痕，用干燥的无菌纱布包裹安甑，将安甑掰开，用一无菌吸管吸取适量0.5〜0.8i】】l的液体培养基（生抱梭菌用液体硫乙醇酸盐培养基；金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌和枯草芽孑包杆菌用营养肉汤培养基；口色念珠球菌、黑曲得菌用改良马丁培养基）滴加到安瓶中，轻轻旋