资源描述：
《【基因工程药物作业】基因工程制备人白介11的技术流程》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、《基因工程药物》课程作业姓名：622学号：20110014XXXX班级：生计口.3基因工程制备人白介"的技术流程一、从NCBI查找人白介11的基因序列(关键词：homosapins,IL-11)在NCBI主页的搜索框选择Nucleotide,输入关键词“homosapins,IL・11”搜索核昔序列，可以看到前两记录分别为：Homosapiensinterleukin11(IL11),transcriptvariant1,mRNA2,381bplinearmRNAHomosapiensinterl
2、eukin11(IL11),transcriptvariant2,mRNA2,208bplinearmRNA对应蛋白质的isoform也应该有两种，此次我们研究第一种。其序列如见附录一。为得到cDNA,通过此序列的注释知道CDS为154..753,可以得到CDS,见附录二。二、分析该基因的限制性内切酶位点I>J以在httD：〃www.iestrictionmaDDer.org分析该基因的限制性酶切位点。对附录二屮的序列进行分析，结果见附录三。三、翻译该基因的蛋白质序列用DNAMAN的transla
3、tion或者http://web.expasy.org/tnmslate/对附录二的核昔酸序列进行翻译，结果见附录四。四、分析蛋白质的分子量、等电点、糖基化、二硫鍵1、用DNAMAN分析得：ProteinLcngth=199MW=21425.3Predictedpl=l1.202、利用hg:〃web.exDasy.org分析得:http://www.cbs.d(u.dk/services/DictyOGlYc/分析糖基化位点，结果见附录五。http://wcb.cxpasy.org/computc
4、pi/分析等电点得TheoreticalpI/Mw:10.64/21429.21,详细结果见附录六。3、二硫键分析：可以简单看到这个序列中有两个半胱氨酸(3,5),有可能形成二硫键，通过http://cassaiuka.dsi.unifi.it/分析的到结果如下PositionResiduePredictionSite3CD5CD70H107H175H182HM:Metal-bonded,D:disulfide-bonded五、设计用pET-30a质粒在大肠杆菌中表达的引物在目的基因的限制性内切酶
5、位点时，我们发现目的基因没有EcRI,XhoI的酶切位点,所以可以使用EcRI,XhoI双酶切。这两个酶切位点在pET-30a中的位置如下图AfcfelHis^TagTA'ACA-ATGCACCA'CATCATCA'CA'TCT*CTGGTCTGGTGCCACGCGGTTCTGGTA'GAAAGAAACCGCTGCTGC"MetHisHisHisHisHisHisSerSerGIyLeuVaIProfirqGySerGIyMetLysGluThrAlaAlaAlaCGAACGCCAGCACATGG
6、ACAGCCCAGATCTGoGIuArgGInHisMetAsoSerProAspLe^jHis*Tagthrombin如PL""N8EccRVBanjuljSx3伽dillGGTACCGACGACGACGACAAGGCCATGGCTGATATCGGATCCGAATTCGAGCTCCGTCGACAAGCTTGCGGCCGCACTCGAGCACCACCACCACCACCACTGAGATCCGGCTGCIAAGIyvhrAsoAspAsMSQLys匕a^ctAaAsplIcGlyScrGIuPh
7、oGluLouArgArgGlnAIaCysGIyArgThrArgAoProProProProProLcuArgSorGIyCySndpET・30屮)Nco
8、£coRv岛伯
9、T7promoterpnmer#69343-3pETugstreampnmer#69214-3T7promoter.lacoperatorxbarbsAGATCGATCTCGATCCCGCGAAAT*AA*ACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTCTAGAAATAATTTfGT
10、TTAACTnAAGAAGGAGAongrokinasepET-30b(4)...CCGA-ATCGGATCCGAATTCGAGCTCCGTCGACAAGCT•GCGGCCGCACTCGACCACCACCACCACCACCACTGA.pET-30c(+)AIalIeSerAspProAsnSerSerSerValAspLysLeuAIaAIaAIaLeuGluH>$Hi$HisHi$Hi$Hi$EndT7terminator.GGATATCTGTGGATCCGAATTCGAGCTC
