真菌染色新方法的探索

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1、从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果真菌染色新方法的探索【关键词】真菌菌种［摘要］目的：探索一种真菌染色新方法。方法：对传统染色法与改良染色法进行比较。结果：传统染色法镜下所见，菌丝体与孢子分离，底影不干净，影响观察；改良染色法使真菌孢子不易脱落，菌丝和孢子能保持自然形态，染色干净、清晰。结论：本方法简单、易掌握，非常适用于实验室大批量制片。［关键词］真菌菌种；盖玻片；棉兰染色液真菌的种类很多，在自然界分布极广，它的形态结构复杂，菌丝体和孢子的形态特

2、征随真菌种类不同而异，是鉴别真菌的重要依据。传统的真菌染色方法，常常造成真菌孢子脱落，从而改变了它原有的形态构造，影响观察、鉴定［1］。我们经多次反复摸索，利用真菌菌丝体呈上耸向空间生长特征，用插片法使菌丝体生长在盖玻片上，这样制作的真菌染色片效果更为理想，在以往的文献中还未见报道。现将本方法报道如下。　　1材料与方法1．1菌种青霉菌、黑曲菌、黄曲菌、毛霉菌、石膏样小孢子菌、絮状表皮癣菌等，以上菌种均为本实验室保存提供。1．2染液的配制染液课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估

3、计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果苯酚(结晶品)20g，乳酸20ml，甘油40ml，棉兰(Cottonblue)0．0g，蒸馏水20ml，将苯酚、乳酸、甘油溶解于蒸馏水中(可微加热)，再加入棉兰，摇匀，备用。1．3沙氏培养基的制备蛋白胨10g，葡萄糖40g，琼脂1g，蒸馏水1000ml，，20min，备用［2］。1．4方法1．4．1设试验组与对照组两组，各染片100张。试验组即改良的真菌染色法［4］，将沙氏培养基倾注大平板，取无菌盖玻片沾上融化

4、的沙氏培养基，密集竖立插在大平板上，将上述菌种用灭菌蒸馏水轻轻刮下，滴在大平板上，并轻轻摇动，使之均匀分布于平板表面，盖上平板盖，于2℃～2℃湿盒孵育，7h取出后，用镊子轻轻取出盖玻片，用火焰固定或自然晾干后，滴上棉兰染色液，h~h后，于水中轻柔漂洗，然后晾干，放载玻片上封片。对照组即传统的真菌染色法，在无菌载玻片上滴加融化的沙氏培养基1滴~2滴，将菌种接种在沙氏培养基上，加盖无菌盖玻片，于2℃～2℃湿盒孵育，7h取出后，揭开盖玻片，滴加染液，使真菌培养物与棉兰染液混合染色［3］。．2染色效果评判标准优片：镜下观察可见真菌菌丝体和孢子形态保持自然

5、课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果完整，孢子基本没有脱落，底影干净、清晰；良片：在镜下观察可见大部分菌丝与孢子形态较为完整、有少许脱落、底影较脏；差片：在镜下观察可见孢子与菌丝分离、脱落、底影脏，形态不完整。　　2结果试验组：染片100张属优片有80张，良片有10张，差片有10张；对照组：染片100张属优片有10张，良片有10张，差片有8

6、0张。两组优片率比较差异有统计学意义(P　　3讨论两种不同染色方法的结果比较，可以看出制片效果有以下明显差异：传统法由于菌种接种在载玻片琼脂培养，棉兰液染色时，染料挂有琼脂，镜下可见底影脏，影响检测效果；改良法是直接滴加棉兰染液在盖玻片上进行染色，这样有效减少杂质的干扰，提高底影洁净度，镜下可见干净、清晰；传统法掀开盖玻片，容易使孢子与菌丝分离、脱落；改良法是利用真菌菌丝体和孢子向上生长构造，菌丝体和孢子生长在盖玻片上，使真菌形态保持自然完整。我们经多次反复实践证明，本法简单、易掌握，效果好并适合大批量快速制片，不失为一种真菌染色的新方法。　　参

7、考文献：［1］张子康，何光泽，等．医学微生物学与免疫学实验教程［M］.第1版．四川：四川科学技术出版社，1989：7．课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果［2］陆德源.医学微生物学［M］.第5版.北京：人民卫生出版社，XX，11(5).［3］凌启波，梁英杰．常见真菌的形态学特征和常用染色方法［J］．临床与实验病理学杂志，XX，10：19．［

8、4］陈倪勇，肖永波．介绍一种真菌的方法［J］.中华病理学杂志，XX，10．课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在