真菌染色新方法的探索【临床医学参考论文开题报告】

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1、临床医学论文-真菌染色新方法的探索【关键词】真菌菌种〔摘要〕目的：探索一种真菌染色新方法。方法：对传统染色法与改良染色法进行比较。结果：传统染色法镜下所见，菌丝体与抱子分离，底影不干净，影响观察；改良染色法使真菌孑包子不易脫落，菌丝和鞄子能保持自然形态，染色干净、清晰。结论：本方法简单、易掌握，非常适用于实验室大批量制片。〔关键词〕真菌菌种；盖玻片；棉兰染色液真菌的种类很多，在自然界分布极广，它的形态结构复杂，菌丝体和抱子的形态特征随真菌种类不同而异，是鉴别真菌的重要依据。传统的真菌染色方法，常常造成真菌抱子脫落，从而改变了它原有的形态构

2、造，影响观察、鉴定〔1〕。我们经多次反复摸索，利用真菌菌丝彳本呈上耸向空间生长特征，用插片法使菌丝体生长在盖玻片上，这样制作的真菌染色片效果更为理想，在以往的文献中还未见报道。现将本方法报道如下。1材料与方法1-1菌种青霉菌、黑曲菌、黄曲菌、毛霉菌、石膏样小抱子菌、絮状表皮癣菌等,以上菌种均为本实验室保存提供。1-2染液的配制染液苯酚（结晶品）20g，乳酸20ml»甘油40ml，棉兰（Cottonbluc）0・05g，蒸馆水20ml，将苯酚、乳酸、甘油溶解于蒸馆水中（可微加热），再加入棉兰，摇匀，备用。1・3沙氏培养基的制备蛋白B10g，

3、葡萄糖40g，琼脂1g，蒸馆水1000ml»68.95kPa，20min，备用〔2〕。1-4方法1-4-1设试验组与对照组两组，各染片100张。试验组即改良的真菌染色法〔4〕，将沙氏培养基倾注大平板，取无菌盖玻片沾上融化的沙氏培养基，密集竖立插在大平板上，将上述菌种用灭菌蒸镭水轻轻刮下，滴在大平板上，并轻轻摇动，使之均匀分布于平板表面，盖上平板盖，于25°C〜28°C湿盒孵育，72h取出后，用锡子轻轻取出盖玻片，用火焰固定或自然晾干后，滴上棉兰染色液，2h~3h后，于水中轻柔漂洗，然后晾干，放载玻片上封片。对照组即传统的真菌染色法，在无菌

4、载玻片上滴加融化的沙氏培养基1滴〜2滴，将菌种接种在沙氏培养基上，加盖无菌盖玻片，于25°C〜28°C湿盒孵育，72h取出后，揭开盖玻片，滴加染液，使真菌培养物与棉兰染液混合染色〔3〕。1・4・2染色效果评判标准优片：镜下观察可见真菌菌丝体和鞄子形态保持自然完整，鞄子基本没有脫落，底影干净、清晰；良片：在镜下观察可见大部分菌丝与抱子形态较为完整、有少许脫落、底影较脏；差片：在镜下观察可见抱子与菌丝分离、脫落、底影脏,形态不完整。2结果试验组：染片100张属优片有80张，良片有10张，差片有10张；对照组:染片100张属优片有10张，良片有

5、10张，差片有80张。两组优片率比较差异有统计学意义(P<0.01)。3讨论两种不同染色方法的结果比较，可以看出制片效果有以下明显差异：传统法由于菌种接种在载玻片琼脂培养，棉兰液染色时，染料挂有琼脂，镜下可见底影脏，影响检测效果；改良法是直接滴加棉兰染液在盖玻片上进行染色，这样有效减少杂质的干扰，提高底影洁净度，镜下可见干净、清晰；传统法掀开盖玻片，容易使鞄子勻菌丝分离、脫落；改良法是利用真菌菌丝体和抱子向上生长构造，菌丝体和抱子生长在盖玻片上，使真菌形态保持自然完整。我们经多次反复实践证明，本法简单、易掌握，效果好并适合大批量快速制片，

6、不失为一种真菌染色的新方法。参考文献•〔1〕张子康，何光泽，等•医学微生物学与免疫学实验教程〔M〕•第1版•四川：四川科学技术出版社'1989:7・〔2〕陆德源•医学微生物学〔M〕•第5版•北京：人民卫生出版社，2002，11(5).〔3〕凌启波，梁英杰•常见真菌的形态学特征和常用染色方法〔J〕•临床与实验病理学杂志，2003，10：19・〔4〕陈倪勇，肖永波•介绍一种真菌的方法〔J〕冲华病理学杂志，2001，10・