vegfa及其受体vegfr1与子宫内膜癌生物学行为关系的探讨_1

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1、从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果VEGFA及其受体VEGFR1与子宫内膜癌生物学行为关系的探讨【摘要】目的：检测50例子宫内膜癌组织及癌旁正常内膜组织的VEGFA和VEGFR1的表达情况，探讨VEGFA及其受体VEGFR1是否与子宫内膜癌的侵袭与转移有关。方法：采用RTPCR技术对50例癌组织及癌旁正常组织进行VEGFA和VEGFR1mRNA半定量检测；采用Westernblot进行其蛋白质表达的半定量检测。结果：癌组织VEGFＡ和VEGFR1mRNA表达水平及蛋

2、白质水平均明显高于癌旁正常内膜组织；VEGFＡ和VEGFR1的高表达与子宫内膜癌肌层侵袭的深度有关，与淋巴结的转移无关；低分化癌组织VEGFＡ的表达明显高于中、高分化，VEGFR1的表达与细胞分化无关。结论：VEGFＡ及其受体VEGFR1的高表达可引起子宫内膜癌的肌层侵袭；癌分化越差，VEGFＡ表达越高。【关键词】血管内皮生长因子血管内皮生长因子受体子宫内膜癌侵袭与转移子宫内膜癌的侵袭与转移明显影响着病人的预后，而肿瘤血管的生成是肿瘤侵袭与转移所必须；研究课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学

3、科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果表明，VEGFA可诱导血管生成［1］。本研究就50例子宫内膜癌患者的癌组织及癌旁正常内膜的VEGFA及其受体VEGFR1的表达进行检测，以探讨它与子宫内膜癌生物学行为的关系，现报道如下。1资料与方法一般资料0例子宫内膜癌及癌旁正常内膜组织标本取自XX年3月至XX年12月间在南京大学医学院附属鼓楼医院的住院患者。年龄42～77岁，平均55岁。手术病理分期:Ⅰa例，Ⅰb16例，Ⅰc15例，Ⅱa例，Ⅱb例，Ⅲa例，Ⅲc例。子宫内膜腺癌组织学分级：G111例，G

4、20例，G19例。1．2标本采集子宫离体后立即纵行剖开，取癌组织约cm×1cm大小,在癌组织基底部cm外侧取正常内膜约cm×1cm大小。标本立即放入液氮罐中，-70℃冰箱中保存。1．3采用逆转录聚合酶链反应检测mRNA的表达1．3．1总RNA的提取与鉴定每例标本取100mg组织置于玻璃匀浆器中，采用Trizol一步法提取总RNA，样品经分光光度计检测吸光度A值，根据A值计算总RNA浓度，并行热稳定图像分析系统扫描各电泳带的灰度值，计算VEGFA和VEGFR1与βactin的灰度值的比值，即为癌组织和癌旁正常内膜组织的mRNA表达水平。1．3．2引物及试剂设计的引物由上海生物工程公

5、司合成。VEGFA扩增的上游引物为5′GCAGAAGGAGGAGGGCAGAATC3′，下游引物为5′ACACTCCAGG课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果CCCTCGTCATT3′，扩增片段长度为19bp。VEGFR1扩增的上游引物为5′CAAGTGGCCAGAGGCATGGAGTT3′，下游引物为5′GATGTAGTCTTTACCATCCTGTTG3′，

6、扩增片段长度为49bp。以βactin为内参照，上游引物为5′TTCCAGCCTTCCTTCCTGG3′，下游引物为5′TTGCGCTCAGGAGGAGCAAT3′，扩增片段长度为22bp。Trizol试剂、RNA酶抑制剂、MMIV逆转录酶及TaqDNA聚合酶均购自上海生物工程公司。1．3．3RTPCR逆转录反应体系为30μl，RNA模板量为10μg，采用随机引物法将RNA逆转录为cDNA，在PTC200PCR扩增仪上扩增。总反应体积为50μl，每管加10mmol·L-1VEGFA或VEGFR1上下游引物各1μl，10mmol·L-1βactin上下游引物各1μl

7、，10×PCR缓冲液μl，1mol·L-1MgClμl，TaqDNA酶0.μl，加水至50μl。VEGFA反应条件为：9℃变性1min；5℃退火1min，7℃延伸1min，30个循环；复性min。VEGFR1反应条件为：9℃变性1min；6℃退火min，7℃延伸min，35个循环；复性min。1．3．4PCR产物测定取10μlPCR反应产物在2%的琼脂糖凝胶中电泳30课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结