vegfa及其受体vegfr1与子宫内膜癌生

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1、VEGFA及其受体VEGFR1与子宫内膜癌生【摘要】目的：检测50例子宫内膜癌组织及癌旁正常内膜组织的VEGFA和VEGFR1的表达情况，探讨VEGFA及其受体VEGFR1是否与子宫内膜癌的侵袭与转移有关。方法：采用RTPCR技术对50例癌组织及癌旁正常组织进行VEGFA和VEGFR1mRNA半定量检测；采用MIV逆转录酶及TaqDNA聚合酶均购自上海生物工程公司。1．3．3RTPCR逆转录反应体系为30μl，RNA模板量为10μg，采用随机引物法将RNA逆转录为cDNA，在PTC200PCR扩增仪上扩增。总反应体积为50μl，每管加10mmol·L-1V

2、EGFA或VEGFR1上下游引物各1μl，10mmol·L-1βactin上下游引物各1μl，10×PCR缓冲液5μl，15mol·L-1MgCl24μl，TaqDNA酶0.4μl，加水至50μl。VEGFA反应条件为：94℃变性1min；56℃退火1min，72℃延伸1min，30个循环；复性5min。VEGFR1反应条件为：94℃变性1min；62℃退火2min，72℃延伸3min，35个循环；复性5min。1．3．4PCR产物测定取10μlPCR反应产物在2%的琼脂糖凝胶中电泳（120V）30min，在紫外灯下观察扩增的特异条带，凝胶图像分析系统扫描各电泳带的灰度

3、值，计算VEGFA和VEGFR1与βactin的灰度值的比值。1．4in，取其上清液，各标本取50μl测蛋白浓度（Brandford法），调整各标本蛋白质量浓度为2mg·L-1。取调整浓度后的组织细胞裂解液10μl加入等体积2×电泳加样缓冲液，均匀后置95℃水中加热10min。采用的分离胶浓度为12%，积层胶浓度为5%，在装置（HoeferPharmaciaBiotechInc，USA，型号为miniVEplete，美国）上电泳，积层胶电压为80V，分离胶电压为120V；电泳结束后转膜，转膜装置（BioRad公司，型号miniproteinⅡcell，美国）设电压90V

4、、电流200mA。转膜后的硝酸纤维素膜在封闭液中温和震荡1h，再把膜放入1∶250的稀释一抗中，4℃过液，用TBST液洗膜3次，把膜置于1∶2000稀释的二抗中温和震荡1h，在TBST中洗膜3次，在暗室中膜上加入ECL液4ml，曝光、显影、定影。图像分析系统扫描各X片条带的灰度值，计算VEGFA和VEGFR1与βactin的灰度值的比值,即为癌组织和正常内膜组织的蛋白质表达水平。2结果2．1子宫内膜癌及癌旁正常子宫内膜VEGFA和VEGFR1的表达结果见表1和图1。2.2子宫内膜癌VEGFA和VEGFR1的表达与组织病理学关系结果见表2、3。癌旁及深肌层组VEGF

5、A在mRNA及蛋白质的表达明显高于浅肌层侵袭组（P＜0.05）；G3明显高于G1、G2（P＜0.05）。淋巴结转移组在mRNA及蛋白质的表达与淋巴结未转移组无显著差异（P>0.05）。宫旁及深肌层组VEGFR1在mRNA及蛋白质的表达明显高于浅肌层侵袭组（P＜0.05；G3与G1、G2在mRNA及蛋白质的表达无差异（P>0.05）。淋巴结转移组在mRNA及蛋白质的表达与淋巴结未转移组无显著差异（P>0.05）。表1子宫内膜癌及癌旁正常子宫内膜3讨论3.1VEGFA及其受体VEGFR1的分泌及作用机制VEGFA是由肿瘤细胞及炎症浸润细胞所分泌［1］。它通过

6、其受体VEGFR1及VEGFR2引起血管生成［2］。VEGFR1在血管内皮细胞上表达，也可在单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞、外周细胞和胎盘的滋养细胞中表达[3]。Laxmanan等[4]研究发现VEGFA可通过树突状细胞上的VEGFR1改变树突状细胞的功能，从而使机体对肿瘤细胞的免疫抵抗力下降，肿瘤细胞易于转移和扩散。Yokoyama等［5］通过对86例子宫内膜癌组织进行免疫组化研究发现，VEGFA及其受体在子宫内膜癌细胞浆表达。VEGFR1和VEGFR2在癌组织中也可在血管内皮细胞上表达。通过自分泌和旁分泌调节肿瘤血管的生成，促进肿瘤细胞的增殖。本研究结果显示，

7、与癌旁正常子宫内膜组织相比，子宫内膜癌组织VEGFA和VEGFR1的表达明显增高；表明子宫内膜癌组织分泌VEGFA和VEGFR1。表2子宫内膜癌VEGFA的表达与手术病理分期的关系表3子宫内膜癌VEGF1的表达与手术病理分期的关系3．2VEGFA及其受体VEGFR1在子宫内膜癌侵袭与转移的作用本研究结果显示，癌组织VEGFA和VEGFR1的表达明显高于正常内膜组织，深肌层和宫颈宫旁侵袭时VEGFA和VEGFR1的表达明显高于浅肌层侵袭，但淋巴结转移患者VE