【教学参赛课件】DNA重组技术的基本工具

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1、专题1基因工程基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫做DNA重组技术。参赛选手：****学习目标1.了解基因工程的概念并掌握其要点。1.掌握限制性核酸内切酶的种类及作用。（重点）2.掌握DNA连接酶的作用。（重点）3.掌握基因工程载体的种类并理解其应具备的条件。（难点）基因工程的概念别名：原理：操作对象：操作水平：优点基因重

2、组DNA重组技术基因分子定向改造生物的遗传性状提取培育抗虫棉的简要过程苏云金芽孢杆菌毒素蛋白基因导入普通棉花细胞（受精卵）抗虫棉来源作用作用结果自主学习主要从原核生物中分离纯化而来1、识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列2、使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。形成两种末端：黏性末端或平末端分子手术刀——限制性核酸内切酶大肠杆菌的一种限制酶(EcoRⅠ)只能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开。EcoRI限制酶的作用思考：1.获取目的基因的过程中断裂了哪些键？2.限制酶断裂

3、的是哪个化学键？用红颜色笔在图中标出3.什么是黏性末端？可产生几个黏性末端？请在模型中标出黏性末端...CTTCATGAATTCCCTAA......GAAGTACTTAAGGGATT...GGCATCTTAAAATTCCGTAG练习使用EcoRI剪切目的基因GGCATCTTAAAATTCCGTAG目的基因CTTCATGGAAGTACTTAAAATTCCCTAAGGGATT平末端　　　平末端SmaI限制酶的切割当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA两条单链的切口，是平整的，这样的切口

4、叫平末端。基因的载体（1）将外源基因送入受体细胞（2）质粒、噬菌体和动植物病毒等（3）原核和真核生物（4）DNA质粒DNA质粒质粒既然是环状的，它怎样才能携带目的基因？请动手操作一下。2.质粒若能携带目的基因，质粒的切口与目的基因的切口有什么关系？这对切割它们的限制酶有什么要求？剪个切口切口相同相同的限制酶载体的必要条件1）能够在宿主细胞中复制并稳定地保存。2）具多个限制酶切点，以便与外源基因连接。3）具有某些标记基因，便于进行鉴定和选择。4）必须是安全的，对受体细胞无害。5）载体DNA分子应大

5、小适中，以便于提取和操作使用DNA连接酶制作重组DNA分子甲片段CTTCATGAATTCCCTAAGAAGTACTTAAGGGATT乙片段GGCATCTTAAAATTCCGTAGGGCATCTTAAAATTCCGTAG比较DNA连接酶和DNA聚合酶DNA聚合酶DNA连接酶比较DNA连接酶和DNA聚合酶项目相同点（化学键）不同点（对象）DNA连接酶都连接磷酸二酯键连接DNA片段DNA聚合酶连接一个一个脱氧核苷酸基因操作的基本步骤1.提取目的基因2.目的基因与载体结合3.将目的基因导入受体细胞4.目

6、的基因的检测与鉴定